肝癌细胞系中乙型肝炎病毒x蛋白与缺氧诱导因子-1α表达的研究

【摘要】：正乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)由该病毒的四个开放读框之一编码,通过多种机制参与肝细胞性肝癌(HCC)的发生与发展。缺氧诱导因子-1(HIF-1)是在缺氧细胞和肿瘤细胞中发现的转录因子, 能促进包括血管内皮生长因子基因在内的多种基因转录,与肿瘤的发生和发展密切相关。近年的研究提示,HBx可通过上调HIF-1的表达而促进肝癌的发展。本文研究了HBx基因转染的肝癌细胞系中HIF-1α的表达,并探讨了HBx调节HIF-1表达的可能机制。用免疫荧光技术和western blotting检测HepG2(人肝癌来源的传代细胞系)和转染了HBx基因的HepG2(HepG2-X)细胞中HIF-1α在常氧(5％CO2和95％空气)和缺氧(1％O2,5％CO2和94％N2)两种状态下的表达情况。用流式细胞仪测定HepG2和HepG2-X细胞中活性氧(ROS)的产生水平。结果发现,在常氧状态下,用免疫荧光技术检测,HIF-1α在HeptG2中表达阴性而在HepG2-X中表达显著阳性;用western blotting检测,HIF-1α在HeptG2中表达呈微弱阳性而在HepG2-X中表达呈显著阳性。在缺氧状态下,HIF-1α在HepG2和HepG2-X中均有较强的表达,而在HepG2-X中的表达更强。此外,在常氧状态下,ROS 在HepG2-X中的水平显著高于在HepG2中的水平。而在缺氧状态下,ROS的产生在HepG2和 HepG2-X中均显著增强;在HepG2-X中的水平略高于在HepG2中的水平。我们认为HBx可诱导 HIF-1α在常氧状态下、并增强其在缺氧状态下在人肝癌细胞系中的表达;由于最近有报道指出ROS 可诱导HIF-1α的表达和稳定HIF-1α,故我们提出HBx可能是通过促进ROS的产生而诱导或增强 HIF-1α的表达。本实验的结果支持HBx诱导肝癌的一种新通路或机制的存在,即HBx通过增加ROS 水平而上调HIF-1α的表达,后者进而刺激血管增生并促进肿瘤组织生长。