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纯化重组人肝刺激因子在不同微环境中的变性和复性研究

阳志成  余和芬  杨琳  张英侠  安威  
【摘要】:正目的:利用基因重组技术,获得纯化的重组人肝刺激因子,以研究其在不同pH值环境中或不同温度下蛋白质构象的改变。方法:构建人肝刺激因子(hHSS)和谷胱甘肽转移酶(GST)融合表达载体,转化大肠杆菌BL-21(DE3),获得纯化的hHSS单体。将1.0μM hHSS溶液在不同pH值(pH =2-12)溶液中变性12小时;或在不同温度下(25℃-100℃)变性15min;同时以游离Tyrosine 和Tryptophan溶液作对照,记录其同步荧光光谱。并将0.3mg/ml hHSS溶液经上述变性处理后,记录hHSS溶液的远紫外CD谱。不同因素处理的hHSS经复性后,再分别记录其同步荧光光谱和CD 谱。结果:①在pH值4时,hHSS溶液的Trp残基同步荧光最大峰值发生蓝移。说明此时hHSS 构象发生改变。②通过与游离Trp和Tyr同步荧光光谱比较,在pH≤3或pH≥10时hHSS溶液的相对荧光强度增强,也说明蛋白构象改变。③在温度90℃时,hHSS同步荧光峰值发生红移;同时相对强度明显增强。④CD谱显示,在pH≤2时或温度≥90℃时,hHSS的二级结构发生改变,a螺旋明显增加。⑤复性后部分构象恢复。结论:hHSS只在pH4、pH≥10的环境中或温度≥90℃时构象发生改变,说明hHSS具有很强的耐酸耐碱和耐高温能力。

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