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《中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集》2005年
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不同上样方式对双向电泳图谱质量的影响比较

丁勤学  刘进  何大澄  
【摘要】:正蛋白质组技术难点之一是如何获取尽可能多的细胞或组织的蛋白信息。双向电泳蛋白斑点数目直接反映了实验蛋白质组信息的完整性。除样品制备外,蛋白上样方式对双向电泳图谱的质量和完整性有直接的影响。实验论文从以下三个方面考察不同的蛋白上样方式对双向电泳图谱的影响: 1.水化上样与杯上样;2.一次上样与重复上样;3.酸性端加样与碱性端上样。实验结果发现:1.蛋白上样量较大时,杯上样方式的图谱斑点数目较水化上样方式明显增多;2.样品蛋白浓度较高时,稀释多次上样明显优于一次性浓缩蛋白上样;3.与文献建议有所不同,对某些蛋白裂解液而言(如MCF-7 乳腺癌细胞和HEp-2喉癌细胞),酸性端加样对碱性蛋白的分离未发现明显优势。相反,在等电聚焦伏小时足够的前提下,碱性端加样对碱性端蛋白反而有利,表现为斑点数目较多,而且等电点方向拖尾减轻。以上实验结果对提高双向电泳的质量以及以双向电泳为蛋白分离平台的蛋白质组信息的完整性提供了有益的技术参考。

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