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《中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集》2005年
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鹰嘴紫云英抗甲硫氨酸变异系的筛选及其原生质体培养再生

张改娜  王瑛华  侯岁稳  贾敬芬  郝建国  
【摘要】:正鹰嘴紫云英(Astragalus cicer L)是豆科黄芪属多年生牧草,具有较强耐旱能力.其营养丰富, 但缺乏必需的含硫氨基酸,这就限制了动物对总氨基酸的吸收。因此培育能过量积累含硫氨基酸的品种,可大大改善其营养品质。本研究用鹰嘴紫云英籽苗下胚轴诱导的愈伤组织为起始材料,进行了抗甲硫氨酸变异系的离体筛选。将旺盛增殖期的愈伤组织小块经半致死剂量NaN3(1.5mmolL-1) 诱变处理2h,恢复生长4周后,在含100mmolL-1(对正常细胞为致死剂量)甲硫氨酸的MS+2,4-D (2.0mgL-1)+6-BA(0.5mgL-1)+KT(0.5mgL-1)的培养基上进行一步正筛选。大约培养2个月后,在诱变处理的大量愈伤组织上出现少数几块新生出的小愈伤组织。将其在无甲硫氨酸的培养基上扩增培养后,再在含100mmolL-1甲硫氨酸的上述培养基上进行继代培养,每3周转代一次.经连续6代选择培养获得抗甲硫氨酸变异系。脱离选择压力培养6代后,进行生理生化分析表明,抗性系仍然具有对甲硫氨酸的抗性,在含100mmolL-1甲硫氨酸的培养基生长30d后,其相对生长率是对照的11.9 倍。游离氨基酸分析显示,抗性系甲硫氨酸含量是对照的5.65倍,天冬族其它氨基酸含量也比对照有大幅度提高。SDS-PAGE及同工酶分析表明,抗性系可溶性蛋白,过氧化酶同工酶及细胞色素氧化酶同工酶酶谱均与对照有显著差别。该抗性系愈伤组织已在含6.BA(0.5mgL-1),KT(0.5mgL-1)和 AgNO3(10-30mgL-1)的MS培养基上分化出再生植株。

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