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《中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会论文集》2015年
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多头带绦虫(Taenia multiceps)dUTPase基因的克隆、原核表达及其产物的酶学活性分析

黄兴  王宇  古小彬  汪涛  赖为民  彭雪蓉  杨光友  
【摘要】:目的克隆和原核表达脑多头蚴dUTPase基因并分析其酶学活性。方法从羊脑多头蚴原头节提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增脑多头蚴dUTPase基因,将其克隆入原核表达载体pET-32a(+)中,构建pET-32a-dUTPase表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot检测表达产物,用免疫荧光组化法检测dUTPase基因在多头带绦虫成虫体内的表达分布情况,并对dUTPase重组蛋白进行酶学活性分析。结果基因序列分析结果表明脑多头蚴dUTPase基因与猪囊尾蚴、豆状囊尾蚴和亚洲带绦虫dUTPase基因的核苷酸序列相似性分别为100%、96%和99%;纯化后的原核表达产物中dUTPase蛋白的含量为0.907 mg·mL~(-1)。免疫荧光染色结果显示dUTPase蛋白大量分布于多头带绦虫成虫的体壁处;纯化的脑多头蚴dUTPase的比活力为986.29Umg~(-1),酶学活性试验证实dUTPase蛋白能特异性降解dUTP,同时EDTA可以抑制dUTPase的活性,而Mg2+可增强dUTPase的活性。结论本研究成功表达了脑多头蚴dUTPase基因并鉴定了它的酶学活性,为进一步研究dUTPase在脑多头蚴中的生物学功能奠定了基础。

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