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《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会论文集》2012年
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新型痘苗病毒穿梭载体的构建及评价

杜寿文  李昌  王宇航  刘存霞  任大勇  李沂  秦艳青  张轩源  金宁一  
【摘要】:痘苗病毒具有广阔的克隆空间、广泛的宿主和细胞范围、可形成稳定的重组体等特点,而且相对毒力较弱、比较安全,广泛用于生物医药研究与开发。目的:获得一种新型痘苗病毒穿梭载体,并对其重组及表达功能进行验证,为新型基因工程活病毒载体疫苗的研制及生物技术药物研发奠定坚实基础。方法:本研究本着提升临床应用安全性、外源基因高效表达及多价疫苗研制的理念,设计、构建了一个痘苗病毒穿梭载体(pSTKE),以痘苗病毒胸苷激酶基因(TK)作为筛选标记,包含三个独立的外源基因表达盒,启动子为痘苗病毒早晚期强力复合启动子(PE/L),能够实现外源基因的全程表达。然后以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、红色荧光蛋白(RFP)和蓝色荧光蛋白(BFP)为报告基因,以中国天坛株痘苗病毒(VTT)为原始毒株,对每个表达盒的表达功能进行验证,并应用PCR、实时荧光定量PCR方法和Western blot对重组病毒的表达量和遗传稳性进行了检测。结果:设计构建的痘苗病毒穿梭载体的三个表达盒均具有高效的重组和表达能力,同时筛选获得两株重组痘苗病毒,重组病毒在20代内遗传稳定性良好,且TK基因20代内无回复突变,外源基因得到高效、稳定及持续表达。结论:获得一种高重组率、高效表达、遗传稳定性良好的痘苗病毒穿梭pSTKE,利用该载体构建的重组病毒可同时表达至少3种外源基因,且相互之间没有影响,可有效解决以往重组痘苗病毒安全性低、目的基因表达效率不高、目的基因表达周期不连贯和插入外源基因片段少等问题。目前,本研究室正利用该载体进行HIV,基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)、辛德比斯病毒(Sindbis virus,SINV)、乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)及猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive andrespiratory syndrome virus,PRRSV)等重组痘苗病毒疫苗的研究。
【作者单位】:中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所
【分类号】:S855.3

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