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斯氏副柔线虫线粒体COI基因克隆与序列分析

杨晓野  杨连茹  李文生  刘群  赵治国  王瑞  
【摘要】:骆驼斯氏副柔线虫病是由旋尾目(Spirurata)、柔线科(Habronematidae)、副柔属(Parabronema)的斯氏副柔线虫(Parabronema skrjabini)引起的一种严重危害养驼业的寄生虫病。为研究斯氏副柔线虫种间遗传标记特点,从内蒙古阿拉善盟、巴彦淖尔市和乌兰察布市的骆驼皱胃中采集斯氏副柔线虫成虫,提取虫体DNA,利用线虫线粒体DNA细胞色素氧化酶1(CO1)基因通用引物,扩增斯氏副柔线虫CO1基因,将其克隆到pMD19-T载体后,用PCR技术鉴定阳性菌落并进行测序,运用MEGA4.0和DNAStar5.0软件将测序结果与GenBank公布的旋尾目中柔线科(Habronematidae)、旋尾科(Spiruridae)、吸吮科(Thelaziidae)以及丝虫目(Filariata)中盘尾科(Onchocercidae)线虫的CO1基因序列进行比对分析。结果显示:三个不同地区的斯氏副柔线虫CO1基因序列片段长度均为689bp,同一地区虫体的不同个体间COI序列无差异,不同地区虫体间的COI序列略有差异,其中有672个保守碱基;同其他相关属线虫CO1基因序列比对,斯氏副柔线虫与蝇柔线虫(Habronemamuscae)的同源性最高,为87.4%,遗传距离是0.145;与加利西亚光丝虫(Litomosoides galizai)的同源性最低,为79.8%,遗传距离是0.232;以COI基因作为遗传标记,采用NJ法和MP法所构建的系统发育树均显示斯氏副柔线虫与柔线属线虫位于同一分支。表明CO1基因不仅可以作为斯氏副柔线虫理想的种间遗传标记,也可为该线虫进一步的分子生物学研究提供重要基础。

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