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《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集》2011年
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新孢子虫NcSAG4基因克隆及原核表达

梁茂茂  丁鹤  刘畅  宫鹏涛  李建华  王伟利  杨举  李赫  张国才  张西臣  
【摘要】:为构建新孢子虫NcSAG4基因原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。本研究根据新孢子虫NcSAG4基因序列设计特异性引物,以新孢子虫总核酸为模板PCR扩增目的片段,与pMD-18-T相连构建克隆载体pMD-NcSAG4,经双酶切回收目的片段,与表达载体pGEX-T相连,构建出原核表达载体pGEX-NcSAG4,用IPTG诱导,通过SDS-PAGE及Western blot进行鉴定。结果成功构建了新孢子虫NcSAG4基因原核表达载体pGEX-NcSAG4:SDS-PAGE电泳检测分析,在IPTG诱导下,阳性菌高效表达了分子量为18.79KDa的蛋白质;Western blot显示表达产物可被抗新孢子虫的多克隆血清识别。从而为进一步研究新孢子虫ELISA诊断方法奠定了基础。
【作者单位】:吉林大学畜牧兽医学院
【基金】:吉林省科技发展计划项目(NO.20100222)
【分类号】:S852.723

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