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狂犬病病毒ERA株P蛋白的可溶性表达、纯化及多克隆抗体的制备

孟先明  潘艳  蔡新斌  陆专灵  梁湘  唐海波  杨剑  张红普  罗廷荣  
【摘要】:通过扩增狂犬病病毒ERA株的P基因并定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得阳性P基因重组质粒pET-P,转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导并优化诱导条件,使其在大肠杆菌中以可溶性表达为主。SDS-PAGE电泳分析发现,重组质粒pET-P成功的表达出大小约50 KD的融合蛋白,用Ni-NTA亲和层析在非变性条件下纯化P蛋白,获得纯度较高的蛋白,Western blot鉴定纯化后的P蛋白,结果表明纯化后的P蛋白均可被RV阳性血清和抗His的单克隆抗体识别,证实其免疫原性良好且成功融合表达了His标签蛋白,高纯度P蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,本研究制备的抗体经Westernblot和间接免疫荧光鉴定,都能特异性的识别狂犬病病毒感染细胞中表达的P蛋白,具有较好的特异性,制备的抗P蛋白的抗血清将为进一步研究P蛋白的潜在功能打下良好的基础。

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