副猪嗜血杆菌OmpP2基因的克隆表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

【摘要】：用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌的外膜蛋白ompP2基因,序列测定结果表明扩增片段全长1077bp。将扩增片段插入表达载体pET-32a,转化BL21进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果证实重组融合蛋白约为48KDa,Western-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性。以纯化的重组蛋白ompP2作为抗原,建立副猪嗜血杆菌的抗体间接ELISA检测方法。通过试验确定最佳反应条件为抗原包被浓度4.75μg/ml,4℃包被过夜,待检血清的稀释浓度为1:40,阳性判断标准为OD_(630)大于0.383。特异性和重复性试验表明建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,可用于副猪嗜血杆菌的检测。

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前20条

1	H.C.VAIDYA ,D.N.DIETZLER ,J.H.LADENSON ,张利华;传统ELISA筛选杂交瘤上清鼠单克隆抗体的误差[J];细胞与分子免疫学杂志;1986年03期
2	Rode Pedersen ,李文琦;酶联免疫吸附法(ELISA)测定麻疹IgM[J];微生物学免疫学进展;1983年03期
3	贾然,林嘉友,邹明发,周彤,吴安然;用抗人IgE单克隆抗体测定人血清IgE(ELISA)[J];中国医学科学院学报;1985年03期
4	王正党;王林卿;张彦;彭克高;王嘉福;姜善镇;汪登荣;张武备;;仔猪副轮状病毒(C群)的检出[J];中国病毒学;1989年04期
5	张囡;王志友;张爱华;金玉玲;闭兰;赵亚杰;罗先凤;;抗SARS冠状病毒单克隆抗体的制备和鉴定[J];中国生物制品学杂志;2006年02期
6	姜绍谆 ,于碧云 ,肖毅 ,李新发,汪美先;酶联免疫吸附试验检测乙脑IgM,IgG抗体的研究[J];第四军医大学学报;1981年02期
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8	林伟瑜,武建国;用抗α_2-M单克隆抗体ELISA技术测定尿液中α_2-M(摘要)[J];细胞与分子免疫学杂志;1985年01期
9	李松泉;赵满仓;周景林;刘菊林;尹永诜;崔艳;;抗人载脂蛋白B单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及应用[J];河北医科大学学报;1989年04期
10	张泮河,陈万荣,吴在川,张启恩;检测莱姆病McAb-ELISA竞争法的建立及初步应用[J];细胞与分子免疫学杂志;1992年02期
11	黄金海,刘业兵,丁伯良,张健,王东;间接ELISA法检测鸡新城疫抗体[J];中国兽药杂志;2005年06期
12	李会娜;曹远银;孙艳秋;魏松红;;兔抗2,4-D多克隆抗体的制备[J];河北农业大学学报;2006年03期
13	司瑞;白文涛;张芳琳;刘艳丽;胡刚;吴兴安;阎岩;徐志凯;;布鲁菌核糖体蛋白L7/L12的表达纯化及生物活性鉴定[J];生物技术通讯;2006年06期
14	许道艳;刘仁沿;董玉华;梁玉波;;失去记忆性贝毒ASP酶联免疫检测方法的研究[J];海洋环境科学;2007年03期
15	黎玉梅;邓国华;冉多良;熊蕊;陈化兰;;H5亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备和鉴定[J];新疆农业大学学报;2007年04期
16	刘树玲;杨秀旭;张晓鹏;付玲;李建民;侯利华;陈薇;;抗前列腺干细胞抗原鼠单克隆抗体的制备及其初步鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年05期
17	乔宏兴;边传周;;猪圆环病毒2型Cap基因的原核表达及ELISA检测方法的建立[J];中国免疫学杂志;2009年12期
18	沈茜,唐家琪,秦克锋,汪美先;单克隆抗体在酶联免疫吸附试验检测单纯疱疹病毒抗原中的实用性[J];细胞与分子免疫学杂志;1985年01期
19	单大铭,谢正旸;活菌ELISA夹心法的建立[J];现代免疫学;1989年06期
20	张琦;严红;王香菊;;分泌抗人精液特异蛋白P_(30)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和初步应用[J];中国法医学杂志;1990年02期

中国重要会议论文全文数据库

前10条

1	贾爱卿;李春玲;王贵平;何永龙;袁子彦;;副猪嗜血杆菌OmpP2基因的克隆表达及间接ELISA抗体检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）论文集[C];2010年
2	刘少宁;张兴晓;邹金峰;谢之景;朱岩丽;赵钦;周恩民;姜世金;;检测DuCV抗体ELISA方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
3	陈宗艳;李传峰;刘光清;;Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因表达及其抗体检测ELISA方法的建立[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
4	陈宗艳;李传峰;刘光清;;鹅细小病毒VP3基因表达及其抗体检测ELISA方法的初步建立[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
5	张月侠;宋茂勇;李涛;赛道建;汪海林;;基于ELISA方法的五种蛋白适配体的筛选[A];中国化学会第26届学术年会环境化学分会场论文集[C];2008年
6	骆文茹;周群芳;江桂斌;;稀有鮈鲫血清中卵黄蛋白原检测方法研究[A];第五届全国环境化学大会摘要集[C];2009年
7	江云波;方六荣;肖少波;谢甜甜;陈焕春;;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5-M在大肠杆菌中的融合表达及其ELISA诊断方法的建立[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
8	柴同杰;张绍学;Wolfgang Mueller;;ELISA对动物舍环境气悬魏氏梭菌型别的研究[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
9	熊华;李晓军;齐名;;质粒DNA抗原检测抗ds-DNA的ELISA[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
10	侯丽波;佟巍;谢军芳;乔红伟;丛哲;蒋虹;王卫;魏强;;小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型病毒标准化血清制备及ELISA检测方法的研究[A];实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会论文汇编[C];2009年

中国博士学位论文全文数据库

前10条

1	乐敏;副猪嗜血杆菌基因组学及毒力相关因子研究[D];华中农业大学;2010年
2	汪洋;副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞的转录组学研究与环介导恒温扩增法的建立[D];华中农业大学;2012年
3	商绍彬;猪圆环病毒衣壳蛋白抗原表位的精细定位与间接ELISA检测技术[D];浙江大学;2007年
4	张德勇;基于IBV重组表达蛋白的抗体检测技术及基因免疫研究[D];浙江大学;2005年
5	刘建玲;猪瘟病毒E2基因在PK-15细胞中的表达及本体动物的免疫研究[D];西北农林科技大学;2006年
6	卿柳庭;猪细小病毒非结构蛋白NS1和结构蛋白VP2的研究[D];华中农业大学;2005年
7	Mudasser Habib;兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因片段的原核与真核表达[D];浙江大学;2006年
8	史利军;西尼罗病毒核酸及抗体检测体系的建立与评价[D];华中农业大学;2008年
9	简中友;犬瘟热病毒N蛋白体外表达与诊断技术应用研究[D];吉林农业大学;2008年
10	李保昌;多表位融合HCV抗原的构建与双抗原夹心检测anti-HCV可行性研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年

中国硕士学位论文全文数据库

前10条

1	曹海军;猪乳铁蛋白的分离纯化及其在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达[D];南京农业大学;2008年
2	路立婷;DPV UL46基因转录、表达时相和主要抗原域表达、抗体制备和夹心ELISA检测DPV研究[D];四川农业大学;2010年
3	文永平;鸭瘟病毒TK基因转录与表达时相及TK重组蛋白ELISA方法的建立和应用[D];四川农业大学;2010年
4	边席峰;猪圆环病毒2型ORF2基因的真核表达及间接ELISA方法的建立[D];四川农业大学;2005年
5	李秋霞;非洲猪瘟病毒VP73基因和主要抗原表位区的原核表达及其ELISA检测方法的建立[D];西北农林科技大学;2010年
6	李正平;猪流感病毒H_3N_8亚型NA基因的克隆和原核表达及间接ELISA方法的建立[D];华中农业大学;2010年
7	赵松波;产单核细胞李氏杆菌溶血素基因的克隆与表达[D];甘肃农业大学;2009年
8	张平;猪瘟病毒（CSFV）E~（rns）基因在毕赤酵母中的高效表达及其间接ELISA的初步建立[D];河北农业大学;2010年
9	张美晶;猪肺炎支原体P97 C末端蛋白抗原表位分析及抗原捕捉ELISA方法初步研究[D];中国农业科学院;2010年
10	廖立珊;PRRSV N基因真核表达、ELISA应用及单克隆抗体的制备[D];湖南农业大学;2010年

中国重要报纸全文数据库

前3条

1	本报记者熊燕;植物病毒难遁形[N];云南日报;2009年
2	何国庆张灏;极端微生物菌种资源的开发[N];中国食品报;2009年
3	蔡忠仁;我国海洋生物毒素检测技术获突破[N];中国海洋报;2010年

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