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副猪嗜血杆菌OmpP2基因的克隆表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

贾爱卿  李春玲  王贵平  何永龙  袁子彦  
【摘要】:用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌的外膜蛋白ompP2基因,序列测定结果表明扩增片段全长1077bp。将扩增片段插入表达载体pET-32a,转化BL21进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果证实重组融合蛋白约为48KDa,Western-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性。以纯化的重组蛋白ompP2作为抗原,建立副猪嗜血杆菌的抗体间接ELISA检测方法。通过试验确定最佳反应条件为抗原包被浓度4.75μg/ml,4℃包被过夜,待检血清的稀释浓度为1:40,阳性判断标准为OD_(630)大于0.383。特异性和重复性试验表明建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,可用于副猪嗜血杆菌的检测。

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