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J亚群禽白血病病毒TD-PCR检测方法的建立、优化与初步应用

杭柏林  秦爱建  钱琨  金文杰  沈海玉  吴晓平  仇钰  
【摘要】:为检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的感染,本研究用ALV-J感染DF1细胞提取的总DNA作为模板,以H5和H7为特异性引物,建立了检测ALV-J的降落PCR(Touchdown PCR,TD-PCR)方法,并对反应体系进行了优化。结果表明,建立TD-PCR方法灵敏度高,特异性强,可检测0.105ng的DNA,该方法与网状内皮组织增生症病毒(REV)、马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病毒(CAV)及Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-Ⅰ)没有交叉反应。运用TD-PCR、ELISA以及病毒分离对临床病料的进行检测,结果TD-PCR方法与ELISA检测结果相一致,比病毒分离检出率高。综上所述,本研究建立的TD-PCR检测ALV-J的方法具有快速、灵敏、特异等优点,并可满足临床生产实际的检测需要。

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