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《中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集》2010年
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高致病性与传统型PRRSV鉴别诊断间接ELISA方法的建立及初步应用

肖一红  吕军华  聂力  马晓春  周恩民  
【摘要】:现有的研究结果已经证实,高致病性PRRSV和传统的PRRSV的主要区别是高致病性PRRSV的Nsp2上有不连续的30个氨基酸的缺失,其中29氨基酸是连续的。为建立一种基于血清学水平上高致病性与传统型PRRSV鉴别诊断间接ELISA方法。本研究以此连续缺失的29个氨基酸为研究对象,分别设计特异性引物获得29、15个氨基酸的cDNA缺失序列,克隆入pGEX-6p-1进行表达,制备抗35-VR蛋白的多克隆抗体,利用此抗体对表达的蛋白进行ELISA和western blot鉴定;表达蛋白纯化后包被ELISA板,对ELISA的条件进行建立和优化,确定了临界值,并对604份血清进行了检测和应用。重组抗原得到高效表达,分别命名为D29、D15;优化的ELISA条件为:碳酸盐作为包被缓冲液,D29、D15均包被200 ng/孔,10%小牛血清封闭,在被检测血清1:40稀释。并用以上ELISA条件确定D29蛋白的临界值为0.423,D15蛋白的临界值为0.348。所建立的方法与抗其它病原的抗体没有交叉反应。604份血清中商品化试剂盒、Nsp2-1、D29、D15检测均为阳性的占到60%,分别以Nsp2-1、D29、D15为包被抗原检测的阳性率占到75%、72%和71%。其中以Nsp2-1为包被抗原、商品化试剂盒检测阳性,而以D29、D15均为阴性的血清有17份。至此我们已经成功的建立了高致病性与传统型PRRSV的鉴别诊断方法。

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