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水牛转基因克隆胚胎的制备

陆凤花  罗婵  李楠  王建  韦英明  石德顺  
【摘要】:主要是探讨利用体细胞核移植技术制备水牛转外源基因(EGFP)克隆胚胎的可行性。体外成熟培养22~24h的水牛卵母细胞,放入含有5μg/ml细胞松弛素的操作液中,在装有Spindle View系统的显微操作仪下进行去核。采用电转的方法,将EGFP基因转染到水牛胎儿成纤维细胞,获得转基因阳性细胞克隆,然后以转基因细胞作为核供体,经核移植和电融合后构建核移植重构胚。重构胚经5μM离子霉素激活处理5min并在2mM的6-DMAP中培养3h后,在含有颗粒细胞单层细胞的微滴中(30μl)培养7-9天,观察其卵裂和胚胎发育情况,并在荧光显微镜下,观察重构胚EGFP的表达情况。结果显示:以转基因细胞为核供体构建的重构胚,在荧光显微镜下观察,发现重构胚在2-4细胞阶段观察不到绿色荧光蛋白的表达,在8-16细胞后可观察到绿色荧光蛋白的表达,而且绿色荧光蛋白在每个卵裂球中均匀表达,但其荧光强度很弱;随着胚胎的发育,其荧光强度有所增强,并在囊胚阶段的内细胞团、滋养层细胞中都有绿色荧光蛋白的表达,且囊胚内细胞团的荧光表达强度最强。同时比较了转基因细胞和非转基因细胞核移植后重构胚的发育情况,发现转基因细胞核移植后重构胚胎的分裂率为72.2%(262/363),分裂胚胎阳性率为39.9%(145/363),囊胚率为18.5%(67/363),囊胚阳性率为18.2%(66/363),胚胎的分裂率与非转基因细胞构建的重构胚的分裂率(75.6%,198/262)之间差异不显著(P0.05),而囊胚发育率差异显著(18.5%VS 27.9%,P0.05)。以上结果表明,EGFP可以作为一种标记基因,用于转基因克隆水牛的制备;且用电穿孔法转染水牛胎儿成纤维细胞可以有效的生产水牛转基因克隆囊胚。

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2 Aquiline Loi ,刘凤军;绵羊无活性体细胞核移植后发育成羔羊[J];中国畜牧兽医;2003年04期
3 张美佳;王新庄;钱菊汾;;成熟促进因子与细胞核移植[J];动物医学进展;1997年01期
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7 薛振华;肖炜;朱振营;云鹏;;克隆技术在养猪生产中的应用概况[J];猪业科学;2010年07期
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9 何兰花,卢家现;哺乳动物克隆技术研究进展[J];佛山科学技术学院学报(自然科学版);1999年01期
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11 李光鹏,孟庆刚,谭景和;猪胚胎细胞核移植研究进展[J];国外畜牧科技;2000年05期
12 范必勤;克隆动物研究进展[J];生物工程进展;2000年04期
13 李农;;细胞核移植——无性繁殖方法[J];中国奶牛;1989年04期
14 高正琴,李厚达;哺乳动物克隆技术及其发展历史[J];生物学教学;2002年11期
15 杨春荣,窦忠英;影响哺乳动物细胞核移植效率的因素[J];黄牛杂志;2000年03期
16 Mokhamad Fahrudin,Takeshige Otoi,Tatsuyuki Suzuki;来源于牛冷冻组织体细胞核移植重构胚的体外发育(英文)[J];草食家畜;2001年S2期
17 王涛,王金勇,潘红梅,陈四清;猪细胞核移植研究进展[J];畜禽业;2005年01期
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19 朱彦宾;龙川;冯冲;潘登科;罗玉柱;;Scriptaid处理可提高近交系五指山猪克隆胚胎的发育能力和克隆效率[J];基因组学与应用生物学;2011年03期
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1 陆凤花;罗婵;李楠;王建;韦英明;石德顺;;水牛转基因克隆胚胎的制备[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
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6 刘红波;吕培茹;王献伟;杨小淦;胡林林;宁淑芳;陆阳清;卢晟盛;卢克焕;;广西巴马小型猪转红色荧光蛋白克隆胚胎体内外发育潜能测定[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
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1 宁守良;八五一一奶牛克隆胚胎移植技术达国际领先水平[N];黑龙江经济报;2010年
2 王有佳;全球首例转基因克隆兔在沪诞生[N];人民日报;2007年
3 张秀芳覃静;亚种间克隆水牛研究又获新突破[N];中国畜牧兽医报;2008年
4 支勇平;窦忠英再报喜讯[N];大众科技报;2002年
5 张兆军;抗猪瘟病毒基因克隆猪问世[N];科技日报;2008年
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