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中华大蟾蜍BDNF基因的克隆与原核表达载体的构建

冯军基  童川  赵留涛  刘欣辛  肖传斌  刘忠虎  
【摘要】:哺乳动物中枢神经系统(CNS)神经元受损后的再生和功能的可塑性处于抑制状态,而低等脊椎动物鱼类和两栖类的CNS神经元均具有再生能力和可塑性,研究发现这种差异不是神经元自身的再生能力造成的,而是其所处的再生的分子微环境不同导致的。脑源性神经营养因子(brain derived neurophic factor,BDNF)便是其中的一种分子,BDNF为神经生长因子(neurotrophic factors,NTFs)家族成员,具有维持神经元的存活、促进神经元的发育、增殖分化等作用。本实验通过RT-PCR技术获得了中华大蟾蜍BDNF编码序列,序列5'和3'端分别引入限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ识别位点,并将其定向克隆入pMD18-T载体,测序正确后亚克隆入原核表达载体pET-32a。结果表明,经过PCR、测序和酶切鉴定,所克隆的BDNF基因编码序列正确,并且克隆的BDNF基因编码序列已经正确插入到pET-32a中,成功地构建了原核表达载体pET-32a-BDNF,为进一步研究该两栖动物BDNF基因,及其重组蛋白的体外表达和抗体制备奠定了基础。

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