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非洲鸵鸟Ghrelin基因的克隆和序列分析

王家乡  彭克美  刘华珍  宋卉  程佳月  孙艳芳  
【摘要】:为了探明非洲鸵鸟ghrelin成熟蛋白肽序列,根据GenBank中所公布鸡(GeneBank登录号:AB075215)的Ghrelin成熟核苷酸序列,设计合成一对特异性引物,以45d非洲鸵鸟腺胃组织中总RNA为模板,采用RT-PCR法,扩增出ghrelin成熟蛋白编码cDNA序列,将此扩增产物克隆入pMD18-T载体,进行PCR鉴定及序列测定与分析。结果表明:从非洲鸵鸟腺胃中扩增出了ghrelin基因,扩增产物为191bp;利用DNAMAN将其转化成氨基酸序列,发现非洲鸵鸟ghrelin的成熟蛋白,由28个氨基酸残基构成;同源性分析表明,非洲鸵鸟ghrelin基因与鸡、鸭、鹅、火鸡、鸸鹋、日本鹌鹑ghrelin基因相应序列的同源性分别为95%、94%、84%、83%、84%、84%和82%:氨基酸同源性与鸸鹋、鸡、鸭、鹅、火鸡和鹌鹑分别为88.9%、73%、69.8%、74.6%、73%和68.3%;基因和蛋白氨基酸同源性分析结果说明Ghrelin是一组在进化上高度保守的蛋白质;利用DNAMAN对ghrelin进行进化树分析,进一步发现非洲鸵鸟与鸸鹋的亲缘关系最近。非洲鸵鸟ghrelin成熟蛋白cDNA的成功克隆,为进一步研究非洲鸵鸟ghrelin全基因结构、基因表达与调控奠定了基础。

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