收藏本站
《中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)》2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

鉴别诊断犬细小病毒疫苗毒和野毒株PCR-RFLP方法的建立

易立  程世鹏  王建科  罗彬  杨莘  
【摘要】:引言/目的:犬细小病毒病(Canine Parvovirus disease)是由犬细小病毒(Canine Parvovirus)引起的一种急性、高度致死性传染病,以出血性肠炎或非化脓性心肌炎为主要特征,具有感染率高、发病急、病程短和病死率高等特点。目前,世界各国家多采用CPV弱毒疫苗免疫来预防犬瘟热,但近年来,免疫动物暴发犬细小病毒的病例在世界多个国家和地区都有报道。目前我国流行的犬细小病毒为CPV-2a亚型和CPV-2b亚型,主要使用的犬细小病毒弱毒疫苗为原始的CPV-2亚型细小病毒毒株。在我国,针对犬源CPV VP2基因序列的研究发现,其存在广泛的遗传多样性,并且在基因序列与当前使用的疫苗弱毒株存在明显差异。为了建立快速,有效的鉴别犬细小病毒(Canine parvovirus virus,CPV)野毒株与疫苗株的诊断方法,本项研究根据CPV野毒株与疫苗株VP2基因的保守区域设计特异性引物,结合RsaⅠ酶切位点,建立有效区分CPV野毒株与疫苗株的PCR-RFLP反应。材料方法:本研究以中国农业科学院吉林特产研究所人兽共患病研究室保存的2006~2008年间来自我国湖北、江苏、北京3个省市的15株犬源犬细小病毒为主要研究材料,根据犬细小病毒经典毒株核苷酸序列对比分析,设计针对犬细小病毒特异性区段的PCR反应,对该PCR扩增片断进行RFLP分析。结果:结果显示:犬细小病毒PCR能够检测包括犬细小病毒野毒、疫苗毒以及商品化疫苗,并且通过RsaⅠ酶切PCR产物,根据RFLP的多态性来区分犬细小病毒野毒、疫苗毒;对15份背景清晰的犬细小病毒检测表明,本项研究所建立的犬细小病毒PCR-RFLP与细小病毒血凝试验、犬细小病毒胶体金检测试纸条检测结果完全一致;并且所有犬细小病毒均为细小病毒野毒株(CPV-2a/2b),鉴别诊断效果非常理想。讨论:目前在我国流行的毒株为CPV-2a亚型和CPV-2b亚型,并未出现CPV新型变异株CPV-2c(a/b);本项研究基于上述情况,利用犬细小病毒弱毒(CPV-2)和野毒(CPV-2a/2b)VP2蛋白在297、300、305位上的差异,建立区分它们的PCR-RFLP方法。该方法能短时间内有效区分犬细小病毒疫苗/野毒毒株,不需要任何DNA测序分析,在临床调查分析或者疫苗生产中能够提高检测效率。但是,犬细小病毒属于高度变异的DNA病毒,该方法不能保证对未来出现的新型犬细小病毒亚型进行区分,如果在临床调查中出现酶切效果图谱异常,则需要进一步检测分析。
【作者单位】:中国农业科学院特产研究所
【分类号】:S852.65

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 缪勤,张汇东,朱骞,温海;犬细小病毒南京分离株基因型分析[J];畜牧与兽医;2005年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘志军;万锐;田大勇;王珊;;自然感染犬细小病毒犬的病理学观察[J];安徽农业科学;2008年30期
2 易立;程世鹏;闫喜军;王建科;罗彬;;犬细小病毒VP2基因的遗传变异分析[J];病毒学报;2009年06期
3 易立;闫喜军;罗彬;王建科;赵传芳;吴威;程世鹏;;水貂病毒性肠炎巢式PCR,PCR-RFLP联合诊断方法的建立[J];经济动物学报;2008年04期
4 易立;程世鹏;;犬细小病毒分子生物学研究进展[J];特产研究;2008年01期
5 易立;程世鹏;闫喜军;柴秀丽;罗国良;张海玲;王建科;赵建军;;犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因的克隆分析[J];畜牧与兽医;2008年04期
6 李爽;袁宝;肖书奇;任文陟;张嘉保;赵志辉;雍海平;;猫细小病毒CC-1株NS1全基因的克隆及序列分析[J];畜牧与兽医;2008年11期
7 李希阳;缪勤;张爱华;张洪英;张汇东;张海彬;;犬细小病毒南京株VP2蛋白免疫原性片段的克隆表达[J];畜牧与兽医;2008年12期
8 李希阳;缪勤;张汇东;张洪英;张海彬;;犬细小病毒南京株(CPV-GN)衣壳蛋白vp2基因的克隆与序列分析[J];中国预防兽医学报;2007年08期
9 毕聪明;费东亮;陈强;赵刚;;犬细小病毒VP2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达与检测[J];中国农学通报;2011年07期
10 王俊;舒龙;郭慧琛;曹随忠;彭广能;孙世琪;;犬细小病毒兰州分离株VP2基因的克隆及进化树分析[J];中国兽医科学;2012年08期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 叶俊华;刘清津;李刚;;犬细小病毒病研究进展[A];中国畜牧兽医学会养犬学分会第十二次全国养犬学术研讨会论文集[C];2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前9条
1 陈胜男;犬细小病毒VP2基因的克隆、表达及其重组蛋白的抗原性研究[D];新疆农业大学;2010年
2 李慕瑶;犬细小病毒VP2基因的克隆、表达及在诊断应用上的研究[D];中国农业科学院;2007年
3 姚大伟;PCR在犬常见传染性疾病诊断中的应用研究[D];南京农业大学;2007年
4 路卫星;犬细小病毒病与血管内凝血的研究[D];河北农业大学;2008年
5 易立;犬细小病毒的分离鉴定、序列分析及VP2基因的融合表达[D];中国农业科学院;2008年
6 王微;犬细小病毒VP2蛋白稳定表达细胞系的建立[D];河北农业大学;2009年
7 王洪林;犬细小病毒北京株分离和动物发病模型建立[D];中国农业科学院;2009年
8 郭伟;犬细小病毒分离鉴定及环介导等温扩增快速检测方法的建立[D];内蒙古农业大学;2010年
9 张晋;北京地区犬瘟热、犬细小病毒感染及犬冠状病毒病的分子流行病学调查[D];南京农业大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 徐汉坤,金淮,郭宝发,赖杰;某犬群爆发犬病毒性肠炎的流行病学和临床病理学观察[J];畜牧与兽医;1983年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 易立;程世鹏;;犬细小病毒分子生物学研究进展[J];特产研究;2008年01期
2 魏巍;李肖梁;帅江冰;陈宁;刘刚;方维焕;;犬细小病毒HZ0761株的分离与鉴定[J];畜牧与兽医;2008年07期
3 戈锐;彭广能;夏咸柱;杨松涛;苏建青;邹啸环;冯娜;马晓平;石锦江;;犬细小病毒四川株的分离与鉴定[J];中国兽医学报;2008年12期
4 杜强;邱薇;范泉水;刘华;李作生;郑颖;张富强;;犬细小病毒的分离鉴定[J];动物医学进展;2009年03期
5 曾妮;李刚;朱鸿飞;侯绍华;史利军;;犬细小病毒北京分离株VP2基因的表达与抗原性分析[J];中国畜牧兽医;2010年04期
6 张坤;马丽娟;李刚;黄伟;李伟;贾凤琴;;犬细小病毒VP2基因的原核表达及纯化[J];中国动物保健;2009年12期
7 杨敬;刘宏伟;刘大伟;战大伟;范薇;隋丽华;孙岩松;;犬细小病毒抗原变异株的分离与鉴定[J];军事医学科学院院刊;2006年06期
8 毕聪明;费东亮;陈强;赵刚;;犬细小病毒VP2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达与检测[J];中国农学通报;2011年07期
9 易立;程世鹏;闫喜军;柴秀丽;罗国良;张海玲;王建科;赵建军;;犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因的克隆分析[J];畜牧与兽医;2008年04期
10 颜文卿;吴德峰;戴亚东;林永利;;犬细小病毒病的病原学研究进展[J];动物医学进展;2006年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 易立;程世鹏;王建科;罗彬;杨莘;;鉴别诊断犬细小病毒疫苗毒和野毒株PCR-RFLP方法的建立[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
2 易立;程世鹏;闫喜军;柴秀丽;罗国良;张海玲;王凤雪;赵建军;;犬细小病毒的分离鉴定及核苷酸序列分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年
3 刘清津;叶俊华;杨松涛;夏咸柱;谌南辉;;犬细小病毒NJ-04株的分离与初步鉴定[A];第十三次全国养犬学术研讨会论文集[C];2009年
4 刘清津;叶俊华;杨松涛;夏咸柱;谌南辉;;犬细小病毒NJ-04株VP2的基因克隆及序列分析[A];第十三次全国养犬学术研讨会论文集[C];2009年
5 王淑君;陈创夫;夏咸柱;杨松涛;乔军;邹啸环;马良;耿长国;孟轲音;冯昊;;犬细小病毒四川流行株分离鉴定及其遗传进化分析[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年
6 王增福;崔治中;张志;吴永平;;我国1999-2003年间ALV-J野毒株gp85基因变异趋势[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
7 王旭荣;王小辉;韩富杰;李建喜;孟嘉仁;;甘肃犬瘟热病毒野毒株的分离和N基因遗传进化分析[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(上册)[C];2010年
8 王伟;符芳;陈欣;李雪松;郎越坤;田华彬;张兴娟;李曦;;牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型、猪瘟病毒野毒株和猪瘟病毒疫苗株多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法的建立[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
9 乔军;杨松涛;高玉伟;秦川;华育平;王立刚;刘丹;王玮;周明;夏咸柱;;弓形虫野毒株ROP5蛋白基因的克隆、表达及反应原性研究[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年
10 程相朝;吴庭才;龙塔;李银聚;张春杰;;鸡传染性囊病地方野毒株VP2基因的克隆与序列分析[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会论文集[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前7条
1 华木兰;21世纪疫苗蔬果可治病[N];中华合作时报;2000年
2 张伟;与禽流感病毒赛跑[N];江苏科技报;2009年
3 记者 李颖;北京科兴:正等待大批量生产用疫苗毒株[N];科技日报;2009年
4 记者 杜舜 通讯员 蒋婷燕;“万种微生物计划协作组”深圳启动[N];南方日报;2009年
5 记者 韩战锋;深圳启动一重大基因组计划[N];广东科技报;2009年
6 刘传书;万种微生物基因组计划启动[N];中国食品质量报;2009年
7 记者 刘传书;我科学家发起“万种微生物基因组计划”[N];科技日报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王玉;网状内皮组织增生症病毒的分子流行病学调查及其在宿主免疫选择压下的分子变异[D];山东农业大学;2005年
2 崔言顺;传染性法氏囊病病毒野毒株的致弱与分子机理研究[D];西北农林科技大学;2005年
3 王蕾;禽呼肠孤病毒野毒株σC基因、抗原性及致病性比较研究[D];山东农业大学;2007年
4 孙爱军;马立克氏病病毒野毒株GX0101及其基因敲除株BAC克隆生物学活性的比较研究[D];山东农业大学;2009年
5 刘晓丽;风疹病毒包膜糖蛋白细胞融合活性位点的定位及衣壳蛋白对融合活性的影响[D];山东大学;2009年
6 边疆;吉林省麻疹流行病学分析及麻疹野病毒的病原学研究[D];吉林大学;2007年
7 苏凤艳;水貂CDV的分离鉴定及其主要基因的克隆与免疫研究[D];吉林农业大学;2007年
8 王君玮;貂、狐、貉源犬瘟热病毒分离鉴定与分子生物学特性研究[D];南京农业大学;2008年
9 吴冰;风疹病毒包膜糖蛋白细胞融合的分子机制研究[D];山东大学;2009年
10 陈德胜;传染性支气管炎病毒中国地方流行毒株的分子流行病学研究[D];南京农业大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵云蛟;狂犬病病毒野毒株糖蛋白基因测序及分析比较[D];吉林农业大学;2002年
2 孙洪磊;整合禽网状内皮组织增生病病毒基因的鸡痘病毒分子生物学鉴定及致病机理研究[D];山东农业大学;2010年
3 南松剑;广西狂犬病野毒株N和G基因的克隆与序列分析[D];广西大学;2003年
4 孟庆玲;猪瘟病毒新疆南疆野毒株E2基因序列分析及致病性研究[D];中国人民解放军军需大学;2001年
5 梅双双;新城疫病毒野毒株的分离鉴定及其融合蛋白部分序列同源性分析[D];河北农业大学;2002年
6 孙淑红;中国传染性法氏囊病病毒野毒株致病性的流行病学研究[D];山东农业大学;2003年
7 郭利;RV野毒株L基因C端3’-RACE扩增及序列分析[D];吉林农业大学;2006年
8 宋宏立;2006-2007年狂犬病毒野毒株L基因3’端及聚合酶活性部位序列分析[D];广西大学;2008年
9 王潇;猪瘟病毒内蒙古野毒株与标准疫苗株(C株)E2基因克隆与序列分析[D];内蒙古农业大学;2005年
10 于立娟;禽网状内皮组织增殖症病毒和禽痘病毒间基因天然重组的研究[D];山东农业大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026