收藏本站
《中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)》2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

口蹄疫通用型实时荧光RT-PCR检测方法的建立

邱杨  肖性龙  刘建丽  李惠芳  张经纬  余以刚  吴晖  
【摘要】:目的:本研究旨在运用先进的分子生物学手段,应用日益成熟的实时荧光定量PCR技术建立一个能快速、灵敏、准确检测家畜及其产品中口蹄疫病毒的检测技术平台,达到提高检测灵敏度,降低检测成本,缩短检验周期的目的。方法:根据GenBank数据库中已有的口蹄疫病毒5'端UTR区的IRES片段核苷酸序列,设计口蹄疫病毒引物和Taqman核苷酸探针;按说明书制备定量用标准品;建立荧光RT-PCR的检测方法;进行特异性、灵敏度和重复性实验。结果:该方法对口蹄疫病毒的检测有高度的特异性,O型、A型、C型和AsiaⅠ型均呈阳性反映,而水泡性口炎病毒、牛病毒性腹泻病毒等其他动物病毒均呈阴性反映;将已知拷贝数的体外转录RNA 10倍系列稀释成2.0×10~1~2.0×10~6 6个稀释度,作为标准品,进行口蹄疫荧光RT-PCR扩增,测定其灵敏度。结果证实荧光定量RT-PCR至少可以检测到20个拷贝的口蹄疫病毒;利用3份不同CT值的阳性样品分别由两名操作员进行5次重复检测,结果其CT值变异系数均少于1.5%。以上统计表明本研究所建立的口蹄疫通用型实时荧光RT-PCR检测方法重复性好,可对口蹄疫通用型病毒进行稳定、可靠的检测。结论:该方法对口蹄疫病毒各亚型(包括O型、A型、C型和AsiaⅠ型)的检测有高度的特异性,灵敏度检测表明至少可以检测到20个拷贝病毒核酸,可对低病毒含量的样品进行准确检测,且荧光RT-PCR方法检测所需的病料少,对病料的采集方法、保存及运输等要求不高,对于因保存不当失活的病毒仍可得到客观可靠的结果。另外荧光RT-PCR方法所需时间短,传统方法检测口蹄疫病毒需几天甚至几周,而荧光RT-PCR方法从核酸抽提到反应完毕只需要4 h。因此该方法是一种检测口蹄疫病毒的良好方法,可用于出入境检疫和动物防疫监督部门的疫情监测。

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘湘涛,李忠润,胡弘博,马军武,韩雪清,姜艳春,胡艳君,罗公平;口蹄疫病毒12S抗原免疫学性质的研究[J];中国兽医科技;1996年08期
2 肖扬;;不可忽视口蹄疫的防治[J];农家科技;1999年08期
3 张彦明;王晶鈺;;口蹄疫的诊断与防制[J];中国动物保健;1999年03期
4 胡薛英;口蹄疫病毒的基因枪DNA疫苗[J];畜牧兽医科技信息;2001年11期
5 周小平;;口蹄疫的防治[J];现代农业;2007年03期
6 段文刚;;第八讲 口蹄疫(FMD)[J];畜牧市场;2007年04期
7 张加勇;杨胜利;;口蹄疫免疫、监测及防控措施[J];黑龙江畜牧兽医;2007年12期
8 周喜生;;猪口蹄疫的诊断与治疗[J];河北农业科技;2008年18期
9 殷长海;金宏堂;赵德祥;;散养偶蹄动物口蹄疫的免疫方法[J];畜牧兽医科技信息;2009年05期
10 仁欠端智;马延龙;;牛羊口蹄疫的诊断与治疗[J];山东畜牧兽医;2010年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 邱杨;肖性龙;刘建丽;李惠芳;张经纬;余以刚;吴晖;;口蹄疫通用型实时荧光RT-PCR检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
2 杨鑫;王红宁;周英顺;高荣;曾博;徐昌文;丁梦蝶;;猪源O型口蹄疫病毒分离株VP1基因特征分析[A];四川省动物学会第九次会员代表大会暨第十届学术研讨会论文集[C];2011年
3 邬苏晓;刘镇明;罗满林;戚一达;;口蹄疫病毒3ABC基因的原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
4 潘群兴;王永山;何孔旺;欧阳伟;王晓丽;诸玉梅;夏兴霞;;重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
5 李夏莹;王建昌;郑世军;;口蹄疫病毒VP1,2C蛋白与宿主细胞相互作用机制的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
6 张洪勇;金宁一;;口蹄疫病毒RNA组成、功能及分子致病机制的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
7 鲁会军;韩松;郑敏;贾雷立;王凯;金宁一;;口蹄疫病毒3AB基因在重组杆状病毒中的表达及检测[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
8 张洪勇;金宁一;;口蹄疫病毒分子流行病学的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
9 郑敏;金宁一;张洪勇;刘棋;韦婷;郭建刚;李华明;尹革芬;鲁会军;;口蹄疫病毒O/NYOO株的分子生物学特性研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
10 郝雪梅;;口蹄疫流行病学及防制措施[A];中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 江南雪舞;谈谈口蹄疫病毒[N];大众卫生报;2005年
2 廖学时;构建感染性口蹄疫病毒粒子成功[N];医药导报(中药报);2004年
3 河北省畜牧兽医站 韩庆安(高级兽医师);春防牲畜口蹄疫[N];河北科技报;2006年
4 本报记者 刘丁;口蹄疫阴影下的“英国病人”[N];华夏时报;2007年
5 ;猪口蹄疫病的诊治[N];中国畜牧兽医报;2008年
6 刘书梅;春季应做好猪口蹄疫的防治工作[N];河南科技报;2007年
7 郭林;口蹄疫扩大:欧盟对英出口亮红灯[N];光明日报;2007年
8 刘静 王海燕;如何防治猪口蹄疫[N];河南科技报;2008年
9 ;口蹄疫[N];中国畜牧兽医报;2006年
10 记者  张筱欣 董敬民;北京局成功研发口蹄疫病毒亚洲I型快速检测方法[N];中国国门时报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李勇;口蹄疫病毒3C(D)蛋白与宿主细胞因子Fascin-1相互作用研究[D];武汉大学;2010年
2 吴雨霞;口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因在原核和真核细胞中的表达[D];甘肃农业大学;2003年
3 朱远茂;表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组牛疱疹病毒1型的构建及其免疫研究[D];东北农业大学;2010年
4 邵寒娟;A、O型口蹄疫双价疫苗研究[D];厦门大学;2004年
5 白兴文;我国O型泛亚1系口蹄疫病毒表型差异的分子基础[D];中国农业科学院;2012年
6 洪琦;口蹄疫—伪狂犬病二价与口蹄疫—猪细小—伪狂犬病三价基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2005年
7 潘丽;口蹄疫病毒免疫原基因在番茄和拟南芥中的表达及转基因番茄动物免疫试验[D];中国农业科学院;2005年
8 金明兰;口蹄疫病毒基因重组鸡痘病毒活载体疫苗系统鉴定研究[D];吉林大学;2007年
9 易建中;抗A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒重组双价多肽疫苗研究[D];复旦大学;2005年
10 王鹏雁;口蹄疫病毒干扰RNA转基因小鼠模型的构建[D];石河子大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张先锋;口蹄疫病毒非结构蛋白基因3ABC、3AB、3A的克隆表达及3A蛋白间接ELISA方法的初步建立[D];新疆农业大学;2010年
2 裴志花;牛O型口蹄疫病毒内蒙古疫苗株p1基因的克隆与序列分析[D];内蒙古农业大学;2005年
3 金华利;口蹄疫病毒vp1体外表达和DNA疫苗免疫效果的研究[D];新疆大学;2004年
4 王钢;口蹄疫病毒VP1基因的序列分析及巢式PCR检测研究[D];四川农业大学;2005年
5 田飞鹏;杆状病毒介导O型口蹄疫病毒P12A和3C基因在Sf9细胞和BHK细胞中的共表达[D];西北农林科技大学;2010年
6 杜宇;猪O型口蹄疫病毒VP_1基因的原核表达及重组蛋白的反应原性检测[D];山西农业大学;2005年
7 徐宗香;口蹄疫病毒VP2蛋白B细胞线性表位的鉴定[D];东北农业大学;2009年
8 孙晓智;口蹄疫病毒环介导等温扩增检测方法的建立与评价[D];内蒙古农业大学;2007年
9 王海烽;O型口蹄疫病毒VP1蛋白原核表达及结构预测[D];新疆农业大学;2009年
10 李平花;口蹄疫病毒结构蛋白VP2-3-1基因的克隆及其原核表达[D];甘肃农业大学;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026