收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性分析

朱小宁  余兴龙  盛益颖  李润成  罗维  葛猛  刘俊奇  刘春红  肖利军  将大良  
【摘要】:根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZ_ABKM01000005,设计一对特异性引物,以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段.将其进行T-A克隆,构建pETD15质粒并进行序列测定和分析.结果表明D15基因含有一个2418bp的开放阅读框,编码805个氨基酸.与D15参考基因序列及其推导的氨基酸序列比较。同源性分别为99.9%和99.8%.序列的5′端有一段18个氨基酸的信号肽,该序列C末端最后10个氨基酸残基:Q-F-Q-F-S-I-G-G-S-F,具有典型革兰氏阴性细菌外膜蛋白特征,对于蛋白定位于细菌外膜有重要意义.以pMDTD15质粒为模板,用PCR的方法扩增副猪嗜血杆菌D15基因,并将其克隆到pET-28a(+)中,构建得到pETD15原核表达质粒,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后,用IPTG诱导重组菌,并用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物.结果表明,pETD15重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白分子量约为94kDa,融合蛋白能被副猪嗜血杆菌阳性血清识别,具有反应原性.将表达的D15蛋白免疫昆明小鼠和豚鼠后,具有一定的保护效力.

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 贾爱卿;李春玲;王贵平;何永龙;袁子彦;;副猪嗜血杆菌ompP2基因的克隆、表达及间接ELISA抗体检测方法的建立[J];中国兽医学报;2011年09期
2 张念章;储岳峰;赵萍;高鹏程;贺英;逯忠新;;重叠PCR法构建副猪嗜血杆菌外源打靶基因[J];生物技术通报;2011年07期
3 张凌云;徐成刚;张斌;张建民;郭莉莉;赵静;周素明;廖明;;2009~2010年华南地区副猪嗜血杆菌分离株ERIC-PCR指纹图谱的鉴定和分析[J];中国兽医杂志;2011年07期
4 李昂;徐成刚;张建民;郭莉莉;张斌;何燕兵;张凌云;任涛;;华南地区两株副猪嗜血杆菌的生物学特性与致病性研究[J];中国畜牧兽医;2011年07期
5 佘志成;范红结;李春玲;王贵平;贾爱卿;杨冬霞;;副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5对豚鼠树突状细胞成熟及功能影响[J];畜牧兽医学报;2011年07期
6 朱必凤;杨旭夫;彭凌;韦昭玉;;副猪嗜血杆菌的MLST分析及数据库建立[J];南昌大学学报(理科版);2011年03期
7 周玉龙;夏伟;陈永松;耿晶;刘辉;詹天龙;李白;侯喜林;朴范泽;;副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验[J];中国畜牧兽医;2011年09期
8 宋德平;肖根辉;王萍;何后军;邬向东;黄冬艳;;副猪嗜血杆菌江西株的分离鉴定及生物学特性研究[J];江西农业大学学报;2011年04期
9 王琴;李华茵;何礼贤;胡必杰;周春妹;高晓东;周昭彦;谢红梅;黄声雷;;Ade ABC主动外排系统及外膜蛋白在鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类耐药中的作用研究[J];中华医院感染学杂志;2011年12期
10 李俐睿;王印;宋勇;钟霏;黄海燕;;副猪嗜血杆菌的分离鉴定和药敏试验[J];动物医学进展;2011年08期
11 黄静玮;汪铭书;程安春;;沙门氏菌分子生物学研究进展[J];中国人兽共患病学报;2011年07期
12 付钰广;关贵全;牛庆丽;杨吉飞;刘志杰;李有全;马米玲;任巧云;刘爱红;彭欲率;罗建勋;殷宏;;伯氏疏螺旋体外膜蛋白C的表达及抗原性分析[J];中国兽医科学;2011年07期
13 封小燕;王艳春;李平超;陶好霞;王芃;袁盛凌;王令春;王普;刘纯杰;;幽门螺杆菌Ure B串联融合表位的表面呈现表达[J];中国生物工程杂志;2011年08期
14 李艳伍;袁文泽;姜平;贾赟;张瑞;;貂阿留申病病毒结构蛋白VP1基因分子特征分析[J];中国动物检疫;2011年04期
15 吉萍;牛明福;邵勇;高丽华;胡显文;;乙型肝炎病毒PreS2蛋白研究进展[J];生物技术通讯;2011年04期
16 张忠兵;李建云;王宇;范蒙光;马志东;夏雅娟;;呼和浩特地区布鲁菌OMP25基因的克隆、序列分析[J];黑龙江畜牧兽医;2011年13期
17 谭铮;许金峰;吴扬;唐彤宇;孙淑艳;王洪军;;艾滋病病毒结构蛋白与IFNα-2b表达产物的细胞免疫[J];沈阳部队医药;2011年04期
18 唐俊妮;康名松;陈焕春;史贤明;周锐;陈娟;杜怡午;;葡萄球菌核酸酶对金黄色葡萄球菌和其他细菌生物被膜形成的抑制作用[J];中国科学:生命科学;2011年07期
19 李向阳;张嘉保;;流产型布鲁氏菌Omp22基因酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定[J];中国畜牧兽医;2011年06期
20 何传雨;丁国婵;王静梅;剡根强;;不同牛源多杀性巴氏杆菌HasR基因的克隆及序列分析[J];中国畜牧兽医;2011年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 朱小宁;余兴龙;盛益颖;李润成;罗维;葛猛;刘俊奇;刘春红;肖利军;将大良;;副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
2 成进;谷文喜;李文蓉;沙依然古丽;依米提;;鸡伤寒白痢沙门氏菌外膜蛋白油乳剂疫苗的研制[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
3 刘燕;韦强;鲍国连;季权安;;不同血清型鸭疫里默杆菌外膜蛋白免疫原性分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
4 朱德康;程安春;汪铭书;;五种血清型的鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白特性比较及其免疫原性的研究[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集[C];2004年
5 丁伯良;鄢明华;王英珍;李秀丽;黄金海;白朋勋;王东;张健;赵向华;;鸡大肠杆菌异型外膜蛋白原生质体融合菌株的构建[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
6 林向民;张丹风;吴丽娜;王三英;彭宣宪;;大肠杆菌K-12外膜亚蛋白质组学研究[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
7 范泉水;邱薇;孙阳;李刚山;杨美峰;尹惠琼;李丽红;;犬型钩端螺旋体外膜蛋白基因的克隆及其表达研究[A];第十三次全国养犬学术研讨会论文集[C];2009年
8 徐常新;王三英;彭宣宪;;对不同Na~+浓度条件下溶藻弧菌外膜蛋白的蛋白质组学分析[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年
9 彭宣宪;;重要革兰氏阴性病原菌外膜蛋白质组学的研究[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会论文集[C];2006年
10 郭晓雅;史皆然;邵成;师长宏;赵勇;吴昌归;;沙门菌外膜蛋白D的原核表达及多克隆抗体的制备[A];中华医学会第七届全国哮喘学术会议暨中国哮喘联盟第三次大会论文汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 乐敏;副猪嗜血杆菌基因组学及毒力相关因子研究[D];华中农业大学;2010年
2 汪洋;副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞的转录组学研究与环介导恒温扩增法的建立[D];华中农业大学;2012年
3 陈品;副猪嗜血杆菌耐药性分子机制研究[D];华中农业大学;2011年
4 都启晶;副猪嗜血杆菌基因组表达文库的构建与其荚膜多糖输出蛋白基因的筛选和免疫原性研究[D];四川农业大学;2010年
5 邹凌云;外膜蛋白序列和结构辨识相关问题研究[D];国防科学技术大学;2008年
6 李军星;副猪嗜血杆菌分子流行病学调查及其HSP70对PRRSV结构蛋白GP3/GP5的免疫协同作用研究[D];南京农业大学;2009年
7 赵燕;铜绿假单胞菌对氨基糖苷类及碳青霉烯类抗生素的耐药性及相关耐药基因的研究[D];四川大学;2004年
8 栗冬梅;汉赛巴尔通体外膜蛋白质组学研究[D];中国疾病预防控制中心;2009年
9 王斌;甲型副伤寒沙门菌CMCC 50973的基因表达谱及外膜蛋白BtuB的保护性研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2012年
10 董妍玲;鱼腥藻PCC7120外膜蛋白的鉴定及功能研究[D];中国科学院研究生院(水生生物研究所);2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 方夏云;副猪嗜血杆菌不同血清型外膜蛋白的免疫原性的研究[D];四川农业大学;2009年
2 顾宏伟;兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白的免疫原性、表位及耐药性的分析[D];南京农业大学;2004年
3 徐瑾;临床分离志贺菌属细菌膜耐药机制的研究[D];郑州大学;2005年
4 王斌;甲型副伤寒沙门氏菌CMCC 50973外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年
5 赵飞骏;梅毒螺旋体外膜蛋白核酸疫苗的筛选构建及其免疫效果的比较研究[D];南华大学;2005年
6 曾凤英;抗淋球菌外膜蛋白PI的多克隆抗体的制备和临床应用初探[D];浙江大学;2002年
7 梁昊宇;甲型副伤寒沙门氏菌外膜蛋白免疫原性研究及其菌体抗原单克隆抗体的制备[D];中国药品生物制品检定所;2006年
8 张振华;鸭致病性肠炎沙门氏菌外膜蛋白组成及免疫原性研究[D];四川农业大学;2008年
9 张洪华;大肠埃希氏菌K-12糖代谢的外膜蛋白质组学研究[D];厦门大学;2008年
10 臧大鹏;牛结核分支杆菌外膜蛋白OMP37、OMP12基因的克隆表达及免疫活性检测[D];山东农业大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 迁西县畜牧水产局 刘新妍;一例猪传染性萎缩性鼻炎和副猪嗜血杆菌病混感的诊治[N];河北科技报;2009年
2 临汾市尧都区畜牧兽医局吉灵记 杜青林;副猪嗜血杆菌病的综合防控[N];中国畜牧兽医报;2008年
3 林杨洲;副猪嗜血杆菌病[N];中国畜牧兽医报;2008年
4 ;副猪嗜血杆菌病的防治[N];中国畜牧兽医报;2009年
5 广西贺州市贺街镇渔牧兽医站 张祥桢 余伟霞 陈宏锐 谢石传;用环球朱保姆治疗副猪嗜血杆菌病效果报告[N];中国畜牧兽医报;2009年
6 华方德;高温高湿谨防副猪嗜血杆菌病[N];江苏农业科技报;2009年
7 周才祥 熊卫文 邵良清;一例副猪嗜血杆菌病的诊疗报告[N];中国畜牧兽医报;2009年
8 上海恒丰强动物药业有限公司技术部 高怀涛;有关副猪嗜血杆菌病的防治分享[N];中国畜牧兽医报;2010年
9 行唐县兽医防疫站 王金合;一例副猪嗜血杆菌病的诊治[N];河北科技报;2010年
10 河北威远动物药业有限公司;浅谈副猪嗜血杆菌病的防治[N];中国畜牧兽医报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978