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《中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)》2009年
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乙型脑炎病毒E蛋白在大肠杆菌中的高效表达

张丹  刘昊  鲁会军  金扩世  于长勇  胡博  颜雯  金宁一  
【摘要】:目的将乙型脑炎病毒E蛋白基因克隆至pET-28a(+)表达载体,构建原核表达质粒pET-28a(+)/E,并使该基因在E.coli中高效表达,为进一步研制乙脑早期诊断试剂奠定基础。方法以乙型脑炎病毒疫苗株全基因序列为模板设计引物,通过RT-PCR方法扩增目的片段,将其克隆到pMD18-T载体中,得到克隆质粒pMD18-T/E.pMD18-T/E经XhoⅠ和EcoRⅠ酶切,测序后连接pET-28a(+)载体,构建了重组原核表达质粒pET-28a(+)/E.转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导获得高效表达。结果扩增出了1500bp的基因片段,与预期大小一致,测序后经Blast验证与已发表乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白基因序列同源性为98%,成功克隆至表达载体pET-28a(+)并获得高效表达,表达产物分子量约为53kDa.结论该表达产物的稳定高效表达为乙脑的诊断试剂开发提供了依据.

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