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《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集》2009年
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长角血蜱隐性抗原基因HI05的克隆和原核表达

张丽艳  刘光远  田占成  谢俊仁  龚真莉  刘建刚  
【摘要】:目的对长角血蜱饥饿雌性成蜱cDNA表达文库进行免疫学筛选得到H105基因,同源性比对发现该基因与青海血蜱Hq05基因同源性为84%,文献表明Hq05表达蛋白对蜱的产卵率及孵化率均有影响。因此本实验以H105为研究对象,确定其对长角血蜱成蜱的保护性,为研制长角血蜱的分子疫苗奠定基础。方法利用5′-RACE技术克隆该基因5′端未知部分序列,从而获得其全长。RT-PCR技术分析其在蜱的不同发育阶段的分布情况。将H105编码区亚克隆后连接到pGEX4T-1原核表达载体上,转化BL21(DE3)宿主菌,经IPIG诱导进行原核表达。用兔抗长角血蜱成蜱全蜱蛋白血清对该表达蛋白进行Western-blot分析,确定其反应原性。结果H105全长为1098bp,包含一个540bp的开放阅读框,编码179个氨基酸残基,预测蛋白分子量为19.69ku.RT-PCR分析发现该基因在长角血蜱的若蜱、成蜱阶段均有表达,而在卵以及幼蜱阶段没有表达。原核表达得到大小为56 ku左右的目的蛋白。与预期大小一致。Western-blot显示兔抗长角血蜱成蜱全虫抗体能够识别该重组表达蛋白。结论H105基因的表达产物具有较好的反应原性,说明其具备成为抗蜱疫苗的潜力。

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