猪带绦虫腺苷酸激酶的克隆及其重组蛋白免疫反应性的评价

【摘要】：目的构建猪带绦虫腺苷酸激酶(adenylate kinase,ADK)基因原核表达载体,将表达的蛋白纯化,并对表达产物的免疫反应性进行评价。方法构建重组原核表达质粒pET28a(+)-ADK,再将该重组体转化到宿主菌大肠埃希菌BL21中,异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导高表达后用亲和层析柱对表达产物进行纯化,Western-blotting方法分析该重组蛋白的免疫反应性。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET28a(+)-ADK重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明该目的基因在大肠埃希菌BL21/DE3中获得高效表达,破碎包涵体并经亲和层析获得了高纯度的蛋白。重组蛋白可识别感染了猪带绦虫、亚洲带绦虫及牛带绦虫病人血清,表明其具有免疫反应性。结论猪带绦虫ADK基因以包涵体形式在原核表达系统中获得具有免疫反应性的高效表达。