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TNF-α对培养奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响

吴娟  王申元  王凤龙  
【摘要】:【目的】研究肿瘤坏死因子-α对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响,从细胞凋亡的角度为乳房炎的防治提供可靠的理论根据和重要的实验依据。【方法】以0.1ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL五种剂量的rhTNF-α作用体外培养的原代奶牛乳腺上皮细胞3h、6h、24h、48h和72h后,采用分光光度法检测Caspase-3酶活性、Annexin V/PI双染色流式细胞术、二苯胺反应法评价细胞凋亡程度,吉姆萨染色观察凋亡细胞的形态改变。【结果】不同时间处理组中:caspase-3的活性在6h时达到最大值,后逐渐降低趋于平缓,3h、24h、48h、72h差异不显著(P0.05);乳腺上皮细胞早期凋亡率在3h、6h、24h逐渐增高,24h时达到最大值,于48h、72h迅速降低,低于3h、6h、24h组(P0.05);总的凋亡和坏死比率在6h时降低,24h开始升高,在48h、72h显著增高,与其他时间点组比较差异显著(P0.05);DNA片段化百分率在6h时降低,以后逐渐升高。不同浓度TNF-α处理细胞:caspase-3酶活性、早期凋亡率、以及DNA片段化比率都高于对照组,且随着TNF-α浓度升高而升高,呈剂量依赖型;不同浓度的TNF-α处理细胞总的凋亡和坏死比率均高于对照组,无剂量依赖性;TNF-α浓度为50ng/ml诱导凋亡作用最强。光镜观察发现部分细胞出现典型的细胞凋亡形态改变。【结论】TNF-α可诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡,并呈剂量依赖型。

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