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《中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集》2008年
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猪瘟细胞活疫苗冻干中预冻温度与预冻速率的制定

袁传华  赵丽霞  崔海侠  潘丽姝  
【摘要】:经检验合格的猪瘟细胞活疫苗抗原和5%蔗糖奶粉保护剂按1.25:1.75配比,用10mL西林瓶分装(西林瓶直径为2.2cm),分装量3mL/瓶(高度为1.4cm)。采用3种不同的预冻方式进行冻干,冻干方案一为:+20℃入箱,入箱后经30min将冻干箱板层温度分别降到-30℃(A组)、-36℃(B组)、-40℃(C组)后,再维持100min进行冷冻干燥;冻干方案二:分A、B、C三组试验,均在-20℃入箱,制品在-20℃的箱内温度下维持30min后分别将冻干箱板层温度降到-30℃(A组)、-36℃(B组)、-40℃(C组)后,再维持100min进行冷冻干燥;冻干方案三:分A、B、C三组试验,均在-30℃入箱,制品在-30℃的箱内温度下维持30min后分别将冻干箱板层温度降到-30℃(A组)、-36℃(B组)、-40℃(C组),再维持100min进行冷冻干燥。最终比较3种冻干曲线的成品效价和外观。结果证明:冻干加工中最重要的是制品的温度和预冻速率,对产品冻结中晶粒的大小、细胞的存活率和升华的速率均有直接影响,在溶液中水分产生晶种的阶段维持一定时间,尽可能多产生一些晶种,及可以保持制品外观均匀细致、体积不变,又可以降低大冰晶对细胞造成的损坏。为降低制品溶液在冻结过程中所产生的机械效应及溶质效应对细胞的损坏,在预冻中后期使制品尽可能快速通过共晶点;根据检测结果结合预冻结束后制品温度对照表,发现3.0mL猪瘟细胞活疫苗使用-20℃预冷入箱,维持30min后降温的预冻速率以及到-36℃最终预冻温度(方案二B组)较其它预冻速率及预冻温度更能有效保持疫苗冻干过程中细胞的存活率,减少疫苗在冻干过程中效价的损耗,并能保持良好的物理外观性状,及较好的复溶性;冷冻干燥是一种优质的干燥方法,这种干燥方法与其他干燥方法相比具有许多突出的优点,由于是低温干燥,使制品中易挥发性成分和受热变性成分损失很小,既不使蛋白质、微生物之类产生变性或失去活力,又可使微生物的生长和酶的作用几乎无法进行,能最好的保持物质原来的性状。但在疫苗生产过程当中,是将含水物质先冻结成固态,水在结晶过程中会对制品产生一定不利影响,尤其是对细胞类制品破坏力更大。溶液中的水份在结晶过程中所产生的溶质效应容易引起对电解质极为敏感的蛋白质失活,丧失其功能,增加细胞死亡的可能性,同时所产生机械效应同样会造成细胞死亡,冰晶越大,细胞膜越容易破裂,造成细胞死亡,冰晶越小干燥后越能反映制品的原来结构,并且溶解更快,但在冻干过程中因水份排出过慢而延长冻干时间;冻干过程中预冻温度与预冻速率对制品影响极大,找到一个适合制品的预冻温度与预冻速率将会提高制品中细胞的存活率及改善冻干后制品物理外观性状。
【作者单位】:金宇保灵生物药品有限公司
【分类号】:S852.5

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