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《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集》2008年
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用反向遗传操作技术产生具有鸡胚高度适应性的H1N1亚型重组猪流感病毒

亓文宝  李小康  和君  齐岩  樊惠英  焦培荣  廖明  
【摘要】:反向遗传操作技术是近几年发展起来的新的方法学,为相关研究开阔了视野,具有良好的应用前景。利用8质粒流感反向遗传系统将流行病毒株主要的保护性抗原HA和NA基因与鸡胚高度适应的毒株的6个内部基因进行重配,以这种6+2的方式能够很快的生产出针对流行病毒株的疫苗。H1N1和H3N2亚型SIV是目前引起我国猪流感主要病原。将猪流感的流行毒珠A/Swine/Guangdong/3/2003(H1N1)(简称为SIV-170)的HA和NA基因克隆至自行构建的双向转录和表达载体pSM-B5中,构建双向质粒pSMB-170HA和pSMB-170NA,用这两种质粒与8质粒病毒拯救系统中含有流感病毒A/Puerto Rico/8/34(H1N1)的6个内部基因的质粒组合(6+2重排),共转染293T细胞,换液后继续培养60h,收获培养液接种11日龄SPF鸡胚,35℃孵育48h,收获尿囊液,测定其有无血凝活性。为了鉴定所获救病毒是否为所需要的病毒,抽提有血凝活性的尿囊液,RT-PCR扩增后进行序列测序及分析,所获得的重组病毒命名为170B-H1N1/PR8株。拯救出的第一代重组病毒170B-H1N1/PR8株的HA效价达到了10log2以上,说明其保持了PR8株在鸡胚上高度的适应性。将该重组毒在SPF鸡胚上连传5代,测定的各代的HA效价均保持在10log2以上,同时第5代重组毒的序列测定结果表明重组毒的HA和NA序列保持不变,说明该病毒有较好的稳定性。重组的170B-H1N1/PR8病毒感染鸡胚的能力强,能够产生高滴度的病毒,而且对鸡胚没有致病力,进一步的实验正在进行中,该重组毒有望成为H1N1亚型猪流感的疫苗候选株。

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