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《中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会论文集》2008年
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绵羊中间丝角蛋白(K2.10)启动子的克隆与活性分析

杜文敬  王春生  梁洋  安铁洙  
【摘要】:绵羊中间丝角蛋白K2.10属于低硫Ⅱ角蛋白,是构成绵羊毛发构成中不可缺少的成分之一。为了探明K2.10启动子在体外的表达活性,本研究中以绵羊基因组DNA为模板克隆获得了绵羊中间丝蛋白基因K2.10基因启动子。将K2.10基因启动子插入到切除了CMV启动子的pAcGFP1-N1质粒中,构建了重组真核表达载体,并采用脂质体法转染传代培养的绵羊皮肤成纤维细胞,检测其表达活性。其结果:(1)K2.10基因启动子序列大小为742bp,与GenBank上S63663(绵羊中间丝角蛋白的参照序列)有99.46%的同源性:与S63663相比,K2.10在36位点存在一个T缺失;在83位点存在一个G插入;在200和645位点分别存在一个C与T的转换;在46位点上具有转录激活蛋白-1(AP-1)的结合位点,在595位点上具有依赖DNA的RNA聚合酶识别位点CAAT box,在131位点上具有细胞核结合蛋白转录因子GAGA;在序列中存在6个核转录因子NF1结合位点和4个反式作用因子NFE1结合位点,但未发现依赖DNA的RNA聚合酶结合位点TATA box。(2)转染48h后,在蓝光激发下检测到绿色荧光蛋白的表达显示,初期细胞核附近表达量高,72h后逐渐减弱,但细胞质内GFP表达量增加,而且这时细胞核附近的荧光强度明显弱于胞质溶胶中的荧光强度。上述结果表明,K2.10启动子在绵羊成纤维细胞中具有表达活性。本研究为进一步探讨通过调控K2.10角蛋白在绵羊被毛中的表达提高羊毛品质或在绵羊被毛中表达外源基因的研究奠定基础。
【作者单位】:东北林业大学生命科学学院
【分类号】:S826

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