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检测禽白血病病毒的荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

李佳桃  汤承  岳华  
【摘要】:gag基因是禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)的群特异性基因,根据GenBank中公布的gag基因的保守序列,按照real-time PCR引物的要求设计合成了1对引物,建立了基于SYBR Green I模式的检测禽白血病病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法只对目的基因有扩增,对其它无关病毒核酸无特异性扩增;扩增效率为94.6%;组内的为0.28%~1.45%;组间CV%为2.13%-3.84%;最低可检测82个拷贝的病毒DNA,在8.2×102~8.2×107拷贝的范围内有很好的线性关系(r=0.9994);可在5h内完成样品检测;与普通PCR方法相比,灵敏度高出103倍。对10例临床疑似样本的检出率为4/10,高于普通PCR的3/10。将4份阳性样本测序,结果证明为ALV的特异序列,与ALV gag基因核苷酸同源性为97.8~98.9%。对重庆14个县的14个健康商品蛋鸡群的134份粪便棉拭子进行检测,ALV的检出率为38.1%,带毒鸡群的阳性率为14/14。本方法的建立为禽白血病的快速诊断、大规模检疫、监测、流行病学调查以及药物筛选等提供了新的检测方法。本方法的建立属于十一五国家科技支撑计划(2006BAD06A11).

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