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柔嫩艾美耳球虫YZ株SO7基因的克隆、核苷酸及氨基酸序列分析

许金俊  陶建平  彭金彪  王留  
【摘要】:本研究对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)YZ株折光体S07抗原基因进行了克隆、核苷酸及氨基酸序列分析。以纯化的E.tenella YZ株卵囊孢子化7h时提取的总RNA为模板,设计特异性引物,应用两步法RT- PCR技术扩增出SO7基因特异性片段。将扩增出的片段插入pUCm-T载体,随机选择经蓝白斑筛选、PCR 及酶切鉴定为阳性的两个克隆分别进行测序分析,并对结果进行验证。结果表明,两个阳性克隆所含插入片段的DNA序列完全一致,含一全长651个核苷酸的开放阅读框,富含AGC和CTG重复序列,编码区核苷酸与LS18株和BJ株的同源性都为99.5%,与HB株同源性为99.4%、与GD株同源性为99.7%。其推测的氨基酸序列与LS18株和GD株的同源性都为99.1%,与BJ和FIB株同源性为98.6%。通过对其蛋白抗原性、表面可能性、亲水性、柔性区、二级结构等参数预测表明,YZ株核苷酸的变异未引起其蛋白主要特性和B细胞表位的变化。研究结果为研制E.tenella的基因工程疫苗奠定了基础。

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