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禽流感病毒H9与H5亚型血凝素基因的分子鉴别

黄兵  马秀丽  王莉莉  李玉峰  刘玉山  陈溥言  
【摘要】:建立简便的一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(AIV)的血凝素(HA)分型进行了研究。参照AIV的HA基因序列设计了1对引物,对H9和H5亚型AIV的扩增产物大小分别为579 bp和177 bp,很容易通过凝胶电泳进行辨别。该引物与EDSV、NDV、IBV、IBDV、REV、REOV及SPF鸡肌肉组织的核酸无交叉反应,对Genebank收录的部分毒株HA序列的互补性分析结果进一步核实了检测引物的特异性。敏感性分析发现,从50 pg的AIV总RNA中亦能检测到目的条带。这些结果表明,此次利用1对引物建立的一步法RT-PCR简便适用,可以在一个反应管中同时将H9和H5亚型AIV进行快速检测和分型。同时,两个亚型的扩增产物均包含了裂解位点在内的HA基因序列,可通过测序推导出氨基酸顺序以判定H5或H9亚型禽流感病毒的潜在毒力。

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