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猪繁殖与呼吸综合征病毒GD株ORF6基因重组腺病毒的构建

王旭荣  宋长绪  杨增岐  王贵平  张春红  祝卫国  黄忠  
【摘要】:根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的美洲株ATCC VR-2332设计并合成针对PRRSVORF6基因的两条引物,通过RT-PCR方法从广东省送检的可疑病料中扩增得到大小为550bD cDNA片段,将此基因片段克隆入pAdeasy腺病毒载体系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV中,经酶切、测序鉴定筛选出重组质粒pAdTrack-CMV-ORF6。将重组质粒与腺病毒骨架载体pAdteasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒质粒pAdCMV-ORF6,然后用PacI线性化后转染293细胞,在293细胞内包装出重组腺病毒。通过荧光显微镜观察、PCR检测得知PRRSV ORF6重组腺病毒的构建获得成功。

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