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《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集》2004年
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抗隐孢子虫子孢子ScFv-PE40重组毒素的可溶性表达

尹继刚  张西臣  李建华  刘晓枫  李德昌  
【摘要】:正 设计一对引物,将ScFv-PE40基因从已经构建好的载体PET28-ScFv-PE40上扩增出来,插入pMal-2X 载体的EcoR Ⅰ和HindⅢ位点,构建表达载体pMal-2X- ScFv-PE40,转化表达菌TB1,lmmol IPTG,37℃条件下诱导3h,在97KD 处出现一条明显的表达条带,与预计分子量大小相符,Western-blot 结果显示,在97KD 处有一条明显的杂交条带,表明该表达产物能够与抗PF40抗血清结合,进一步证实为重组毒素表达产物。将表达茵超声裂解后,取上清和沉淀分别进行SDS-PAGE,结果显示,上清中有表达产物而沉淀中没有。表明重组毒素是以可溶性的形式表达的,表达量占茵体可溶性部分的10%,重组毒素的可溶性表达有利于下一步的活性鉴定。由于pMal-2X 载体的表达产物在前端有一MBP(麦牙糖结合蛋白),从而有利于表达产物的纯化。本研究为下一步研究重组毒素对隐孢子虫的杀灭作用奠定了基础。

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