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重组鸡痘病毒生物安全性评价的PCR方法的建立

郭建顺  金宁一  夏志平  金扩世  徐敬龙  贾雷立  王凯  
【摘要】:根据已发表的鸡痘病毒(FPV)4b核心蛋白基因的核苷酸序列设计合成了2对引物,通过对影响PCR扩增因素的优化,2对引物在同一反应条件下,以抽提vFV 282重组鸡痘疫苗毒DNA或直接用其毒液制备的模板均能分别扩增出预期的549、1 361 bp的片段。特异性检测表明,2对引物对vFV 282重组鸡痘疫苗毒、FPV 102株、FPV 282E4(北京)、FPV 282E4(吉林)、及FPV临床分离株均能扩增出相应特异性片段,而用鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、羊痘病毒、鸡胚成纤维细胞(CEF)制备的模板分别进行PCR扩增却成阴性。敏感性检测表明,2对引物(p1,2、g1,2)分别能检测到10-2、10-3 fmol的FPV DNA和100.5、10-0.5TCID50的病毒。同时试验也对环境中重组鸡痘病毒的浓缩及PCR检测方法进行了探讨。以上结果表明,本试验所建立的rFPV PCR检测法具有较高的特异性和敏感性,模板制作简单,完全可用于rFPV和FPV的检测。

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