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新城疫病毒HN蛋白基因真核表达载体的构建及其表达

丁壮  金宁一  王兴龙  金扩世  王宏伟  吕杰  李太元  米志强  殷震  
【摘要】:将质粒pKSHNS、pKSHNC、pKSHNQ、pKSHNL和pKSHNB利用BamHI和XbaI双酶切后回收。将转座载体pFast BacI同样方法酶切、回收。分别将回收的HNS、HNC、HNQ、HNL、HNB与pFast BaeI连接,使目的基因亚克隆到pFast BacI上的ocu基因启动子下游的MCS上,然后转化E.coli DH5α,以LB/AMP+GM平板筛选阳性重组子,经酶切鉴定,再转化至E.coli DH10 Bac感受态细胞中,经抗性培养和蓝白斑筛选,挑取白色菌落为阳性重组表达载体,经酶切鉴定后,分别命名为BacmidHNS、BacmidHNC、BacmidHNQ、BacmidHNL和BacmidHNB。经小量提取后,转染sf-9细胞,27℃培养72h,应用SDS-PAGE和Western-blot检测和鉴定表达的HN蛋白。结果表明,本研究成功地构建了Bacmid HN重组表达载体,并在sf-9昆虫细胞中表达了NDV HN基因,SDS-PAGE出现一条特异性泳带,约74ku,Western-blot结果出现一条杂交带,分子量与之相同,进一步证明构建的重组表达载体表达了NDV HN基因。

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