转BADH基因狗牙根提高抗旱耐盐性

【摘要】：正狗牙根(Cynodon spp．)是最重要的暖季型草坪草之一,广泛应用于热带亚热带地区的绿化及水土保持。三倍体狗牙根主要应用于高尔夫球场及运动场草坪,由于不能形成种子,营养繁殖是其唯一的繁殖及应用方式,使其传统杂交育种改良受到限制,因而利用基因工程手段对现有品种进行改良显得尤为重要和必要。甜莱碱广泛存在于许多植物中,在干旱、盐胁迫和低温下,起调节细胞渗透势的作用。甜菜碱由其前体物质胆碱在胆碱单氧化酶(CMO)和甜菜碱醛脱氢酶(BADH)催化下合成。本研究以三倍体狗牙根品种Tifeagle(Cynodon dactylon x C.transvaalensis)为材料,以其匍匐茎节为外植体,首先建立Tifeagle的高效组织培养再生体系。将BADH基因与表达质粒NT168 连接,构建成表达载体RTT121。利用基因枪法,将表达质粒与用作筛选的质粒pACH1共转化三倍体狗牙根品种“TifEagle”的胚性愈伤组织。基因枪轰击愈伤组织1 d后,将愈伤组织移至筛选培养基上筛选。筛选时先在50 μ g／L潮霉素的培养基上筛选3周,然后移至含100 μ g／L潮霉素培养基上继续筛选4周,将在褐化愈伤组织上出现灰白色愈伤的愈伤团移至新配制的含50 μ g／L潮霉素的筛选培养基继续筛选4周。将新生长的愈伤组织转移至不含潮霉素的液体培养基上悬浮继代6- 8周,转入分化培养基中再生。将再生植株移至盆栽后,于温室自然光照下培养。