番石榴焦腐病菌的ITS分析及PCR检测

【摘要】：番石榴焦腐病是番石榴生长及果实货架期最主要病害之一,其病原菌为Botryosphaeriarhodina,引起番石榴蒂部及果皮腐烂,其引发的症状与番石榴炭疽病症状相似,在菌落形态上不易区分,且同样具有潜伏侵染的特性。采前对番石榴果实进行快速检测,分析果实中焦腐病菌潜伏侵染情况,对病害早期防治具有重要指导作用。利用真菌核糖体基因内转录间隔区(rDNA—ITS)序列种内的保守性和科属种间可变性的特点,通过在核糖体基因内转录间隔区设计特异引物进行PCR扩增,可进行病原菌的快速检测和鉴定。本研究用真核生物核糖体间的内源转录间隔区ITS序列通用引物ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)扩增番石榴焦腐病菌和其他相关真菌的基因组DNA;并对其PCR产物进行回收、克隆和测序,将所获序列和其他已报道的真菌ITS序列进行多重比对后,设计出Botryosphaeria rhodina的特异引物BF1和BR1。此引物可以从Botryosphaeria rhodina中扩增出287bp的特异性片段,而其余参试菌株的PCR反应结果均为阴性。灵敏度测试结果表明此特异引物能对1pg的焦腐病菌基因组DNA进行扩增。对自然感染焦腐病的番石榴果实和接种焦腐病菌或多种番石榴病原真菌混合接种的果实进行检测,BF1和BR1引物对不仅能够在自然感染焦腐病果实中特异检测到焦腐病菌,而且能在未显症和发病的接菌番石榴果实中特异检测到焦腐病菌。该方法可以应用于番石榴焦腐病的快速、可靠检测。