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《中国植物病理学会2009年学术年会论文集》2009年
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马铃薯腐烂茎线虫β-1,4内切葡聚糖酶基因(Dd-eng-2)cDNA全长的克隆与原核表达分析

彭焕  
【摘要】:β-1,4内切葡聚糖酶是植物寄生线虫分泌的降解植物细胞壁的主要酶类之一,它在植物线虫寄生过程中发挥着重要的作用。本研究以RT-PCR结合RACE的方法成功从马铃薯腐烂茎线虫中克隆出一长度为1164bp的β-1,4-内切葡聚糖酶基因cDNA全长序列(GenBank登录号为FJ374266)。序列分析表明:此cDNA全长序列包括一个1014bp的完整ORF,编码一个含338个氨基酸的预测蛋白,其理论分子量为37.28kD,等电点pI为5.5,含有一个糖基水解酶的保守结构域,属于纤维素酶第五家族成员,N端具有16个氨基酸残基组成的信号肽,但不含CBDII结构域和连接区;同源性分析表明:其基因编码的蛋白和其他内寄生线虫非洲茎线虫和香蕉穿孔线虫的ENG蛋白均有很高的同源性,根据eng基因命名规则,将克隆的马铃薯腐烂茎线虫eng基因命名Dd-eng-2。以PET-21(b)和Dd-eng-2基因构建原核表达载体Dd-eng-2-PET21(b),在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出一个大小和Dd-ENG-2预测蛋白分子量相近的蛋白质条带,且随着IPTG浓度(0.4~1.0mmol/L)的增高其表达量在不断上升,表达蛋白的CMC法纤维素酶活性检测表明:表达的蛋白具有明显的纤维素酶活性。马铃薯腐烂茎线虫β-1,4内切葡聚糖酶基因Dd-eng-2的克隆和表达,将为其寄生机理的研究提供重要的理论基础。
【分类号】:S435.32

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