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《绿色生态可持续发展与植物保护——中国植物保护学会第十二次全国会员代表大会暨学术年会论文集》2017年
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粉红螺旋聚孢霉67-1异核体不亲和性蛋白基因功能研究

姜维治  孙占斌  孙漫红  李世东  
【摘要】:粉红螺旋聚孢霉(Clonostachysrosea)是一类具有良好生防潜力的菌寄生菌,可以有效防治多种植物真菌病害。为研究其寄生相关基因,实验室前期构建了粉红螺旋聚孢霉67-1寄生核盘菌菌核转录组,并从中获得了一个差异表达基因——异核体不亲和性蛋白基因hip67。实时荧光定量PCR测定表明,hip67基因在67-1侵染菌核过程中显著上调表达。从67-1菌株全基因组序列克隆获得hip67基因全长,结果显示,该基因长度2 436bp,不含内含子。生物信息学分析表明,hip67含有1 794bp的开放阅读框,可编码一个由597个氨基酸组成的多肽。为明确hip67基因在粉红螺旋聚孢霉寄生核盘菌过程中的作用,本研究采用基因敲除的方法对其进行功能验证。以pKH-KO为载体,在hph两侧分别插入hip67基因上、下游同源臂,USER酶连接,构建hip67基因敲除载体。进而通过PEG-CaCl_2介导转化方法,将敲除载体转入67-1原生质体中,通过潮霉素抗性平板筛选以及PCR验证,获得3个稳定遗传的突变菌株。生物学测定表明,突变菌株Ahip67在PDA培养基上生长速率和产孢水平显著低于野生菌株(P0.05),基因缺失后对核盘菌菌核的寄生能力显著降低(P0.05),同时对番茄灰霉病菌的颉颃能力下降。温室试验表明,△hip67对黄瓜枯萎病的防效显著低于野生菌株(P0.05)。表明异核体不亲和性蛋白基因参与了粉红螺旋聚孢霉的67-1的寄生核盘菌的过程。研究结果不仅丰富了粉红螺旋聚孢霉菌寄生相关基因的种类,同时也为进一步深入研究粉红螺旋聚孢霉菌寄生机制奠定了基础。

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相关作者
>李玉 >姚方杰
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