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《绿色生态可持续发展与植物保护——中国植物保护学会第十二次全国会员代表大会暨学术年会论文集》2017年
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象耳豆根结线虫新效应基因Me-3C06的克隆及功能分析

冯推紫  龙海波  裴月令  孙燕芳  魏丽莎子  
【摘要】:象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)是近些年引起广泛关注和重视的一个热带根结线虫新种,在亚洲、非洲、欧洲以及北美热带和亚热带地区均有发生分布,该线虫也是为害我国华南热带作物的重要根结线虫种类。研究表明,食道腺细胞特异表达的效应蛋白是根结线虫识别寄主、侵染和寄生的关键因子。本研究从M.enterolobii中分离到一个食道腺细胞特异表达的新效应子基因Me-3C06(KY386298)。序列分析显示Me-3C06cDNA全长为1 313bp,开放阅读框(987bp)推导编码328个氨基酸。Southern blot确认Me-3C06在基因组中存在且具有多拷贝,属多基因家族成员。原位杂交显示Me-3C06在M.enterolobii二龄幼虫的腹食道腺细胞特异表达。利用RT-PCR分析Me-3C06在M.enterolobii不同发育期的表达类型,电泳检测结果显示,Me-3C06在象耳豆根结线虫在迁移性二龄幼虫以及固着性寄生阶段和雌成虫期均能高峰度表达,但在卵期表达水平相对较低。通过将Me-3C06开放阅读框序列克隆至瞬时表达载体,重组子瞬时表达能够诱导烟草细胞死亡。体外反转录合成dsRNA,结合利用RNAi活体外干扰技术,体外反转录合成Me-3C06dsRNA序列,成功诱导了Me-3C06基因的下调表达,并且导致象耳豆根结线虫诱导番茄根系病情指数相比对照下降约46%。根据以上研究结果,可以推测Me-3C06蛋白在M.enterolobii的寄生过程中具有重要作用。

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