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《植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集》2011年
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农杆菌介导的弯孢叶斑病菌GFP和DsRed遗传转化

陈茂功  王晓鸣  李洪杰  周印富  林小虎  
【摘要】:玉米弯孢叶斑病是由新月弯孢[Curvularia lunata(Wakker)Boed]引起的一种重要玉米病害。本研究通过农杆菌介导方法(ATMT),利用gfp和DsRed荧光蛋白基因对弯孢菌进行遗传转化,分析了影响弯孢菌ATMT转化的各种因素和两种荧光蛋白基因对转化子的影响。通过研究建立了农杆菌的高效转化体系,可得到98~110个转化子/10~6个孢子。随机挑取20个转化子提取DNA,用抗潮霉素基因、gfp和DsRed基因进行PCR检测,均获得目的基因扩增片段。转化子的遗传稳定性的分析,随机选择的20个转化子(绿色荧光和红色荧光各10个),在PDA和含50μg/ml潮霉素的PDA上分别转代5次,观察菌落生长和荧光表达,进行转化子的遗传稳定性分析。转化子都能在含潮霉素的培养基上生长,并能在弯孢的菌丝、孢子梗和分生孢子中观察到荧光,表明转化子在遗传上是稳定的。将转化子接种于PDA在25℃培养6~8天,大部分转化子的菌落形态、产孢量和显微纤维特征与野生型菌株相同。采用分生孢子悬浮液喷雾接种进行转化子致病性测定。表达GFP和DsRed蛋白的弯孢菌株与野生型菌株一样能够正常侵染玉米叶片。本研究优化了农杆菌介导转化弯孢的体系,为进一步构建大库容量的T-DNA插入突变体库、致病性突变体筛选以及致病性相关基因的克隆鉴定奠定了基础;获得的荧光标记弯孢菌可用于深入研究这种病原菌与植物的互作。
【作者单位】:中国农业科学院作物科学研究所 河北科技师范学院
【分类号】:S435.131

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