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利用电转化法构建P.syringae pv.tabaci Tn5突变体

陈红  蒋士君  
【摘要】:功能突变体对植物病原细菌功能基因的挖掘具有极其重要的作用。本研究利用电转化法将含有卡那霉素抗性基因的EZ:TN5转座子插入到植物丁香假单胞病菌的基因组中。结果表明,P.syringae pv.tabaci SMX006菌株的电转化效率是0.8×10~3,P.syringae pv.tabaci 4号菌株在电压为l 800V的转化效率是1.64×10~3,在电压为2 400V转化效率为4.2×10~3。通过对转化子进行抗性筛选和PCR插入鉴定,对得到的P.syringaepv.tabaci SMX006的突变体进行致病性,游动性,胞外蛋白酶测定,获得了致病性明显减弱的突变株H028,H029;游动性明显减弱的突变株H028,游动性缺失的突变株H029;胞外蛋白酶产生能力明显变弱的突变株H026,H046,H047,胞外蛋白酶缺失的突变株H045。所获突变体的功能基因的挖掘正在进行中。

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