银耳二型态抑制性差减文库的构建与初步分析

【摘要】：银耳(Tremella fusiformis)又称白木耳,属担子菌亚门、层菌纲、银耳目、银耳科、银耳属,是一种具有二型态现象的胶质食用真菌。银耳二型态是指在银耳的生活史中存在酵母相和菌丝相两种形态,这两种形态能在环境或其它因素的影响下发生可逆互变。本研究以二型态银耳的酵母相和菌丝相为材料,利用抑制性差减杂交技术,分别构建了以银耳芽孢为检测对象的正向差减文库和以菌丝为检测对象的反向差减文库。两个差减文库经过菌落PCR检测,其有效重组率分别达到80%和87%,并且插入的cDNA片段大小在250-1000bp之间。对文库中阳性克隆进行PCR筛选,从正、反两个文库中共选择300个克隆进行测序和BLAST比对分析,结果显示正、反文库中分别有54.24%和62.68%的基因获得功能注释,这些基因涉及到催化、调节、结合、运输、信号传导、调控翻译、分子伴侣等多个方面。进一步挑选7个基因片段,通过RT-PCR对其在银耳两种型态中的表达情况进行检测,发现细胞壁生化合成相关蛋白基因、锌指UFM1肽酶结合域基因、MAP激酶基因、琥珀酰辅酶A:3酮酸辅酶A转移酶基因、丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶PP2A催化亚基基因等在两个文库中表现为明显的表达差异。银耳二型态抑制性差减文库的构建为克隆银耳二型态相关基因以及从分子水平上阐明银耳二型态的发生机理奠定了初步的基础。