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嗜热毛壳菌热稳定酶的基因克隆、表达及分子改造

李安娜  徐荣艳  申晨  郭晓红  李多川  
【摘要】:嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)是一种生长上限温度较高的嗜热真菌,它能够产生很多具有重要工业价值的热稳定酶。本研究从该嗜热真菌中分别克隆和表达了1种脂肪酶、1种β-葡萄糖苷酶基因和1种β-1,3-葡聚糖酶。它们的cDNA序列分别长870bp、3213 bp和2765bp,在GenBank中的登录号分别为EU370914、EF648280、GQ149728。三个基因分别克隆到酵母分泌型表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母GS115,成功实现了热稳定酶在中温菌中的表达。重组酶纯化后进行性质研究表明,重组脂肪酶LM分子量为35kDa,最适反应温度和pH分别为60℃和10.0,该酶在60℃稳定,70℃的半衰期为40min,在pH值为9.0~11.0之间保持稳定的酶活性;重组β-葡萄糖苷酶BGL的分子量约为119 kDa,最适反应温度和最适pH值分别为60℃和5.0,该酶在60℃稳定,70℃保温10 min后剩余酶活为29.7%;重组的β-1,3-葡聚糖酶GLU-N分子量约为94kDa,最适反应温度和pH分别为60℃和5.0,70℃保温60min仍具有60%的酶活性,在pH值为4.0~7.0之间保持稳定的酶活性。

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