金龟子绿僵菌脂被蛋白MPL1基因进化及其磷酸化位点突变的研究

【摘要】：MPL1为金龟子绿僵菌perilipin类似蛋白,该蛋白控制绿僵菌孢子脂滴含量且影响附着胞的膨压及杀虫毒力。本研究中我们克隆测序了不同绿僵菌菌种或菌株的mpl1基因并对它们的孢子脂滴含量进行了统计,基因进化分析表明,mpl1的基因型决定了孢子的脂滴含量,而与绿僵菌种化关系不明显。采用点突变的方式将MPL1中磷酸化位点苏氨酸(Thr)分别突变为类似哺乳动物PerA的磷酸化位点丝氨酸(Ser)和不可磷酸化位点异亮氨酸(Ile)。将野生型及突变型mpl1基因转化到缺失突变株⊿mpl1中,脂滴特异性荧光染料Bodipy染色表明,各转化菌株孢子脂滴含量差异不大,表明突变型mpl1不影响脂滴的积累;但mpl1基因替换的977转化子脂滴含量明显高于野生型及其它转化子。在营养贫乏的培养基(MM)中诱导培养后,突变成异亮氨酸的转化子(Ile)脂滴转运受到影响,而其它转化子均未受到影响。这表明MPL1中磷酸化位点突变成非磷酸化位点后,影响了其在脂滴转运利用过程中的作用。经western blotting验证,突变成异亮氨酸的MPL1不能被磷酸化。台湾乳白蚁生物测定表明,相比野生型,基因替换后的977转化子因其脂滴含量的增加导致了真菌杀虫毒力的增强,而转化子Ile的杀虫速度却明显下降了,说明MPL1的磷酸化位点突变为不可磷酸化位点影响了真菌的杀虫毒力。