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NP-40降低拟穴青蟹精氨酸激酶的免疫分析活性

阮韦伟  曹敏杰  苏文金  蔡秋凤  刘光明  
【摘要】:通过硫酸铵盐析和离子交换层析等方法分离纯化得到拟穴青蟹(Scyllaparamamosain)精氨酸激酶(Arginine kinase,AK)。经PNGase F去糖基化处理及采用兔抗青蟹AK抗体进行western-blotting分析,结果显示,去除N-糖基对AK的分子量及其IgG结合活性没有影响,但是采用过敏患者血清的ELISA分析结果显示,去N-糖基后AK的IgE结合活性明显下降。进一步采用dot-blotting、ELISA法分析去糖基化处理AK过程中加入的NP-40和SDS对AK免疫活性的影响,结果显示,NP-40能够降低dot-blotting和ELISA分析反应中的IgG和IgE结合活性,但同为去垢剂的SDS只降低dot-blotting反应强度,而不影响ELISA分析活性。采用不同浓度梯度NP-40的分析结果表明,低浓度的NP-40可以明显降低ELISA分析反应中的IgG和IgE结合活性。结果表明,NP-40能够降低ELISA和dot-blotting分析反应中TM的IgG和IgE结合活性。

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