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《中国康复医学会第九届全国脑血管病康复学术会议论文汇编》2005年
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表皮生长因子促进脑梗死后神经可塑性和内源性神经干细胞分化的实验研究

余剑  曾进胜  
【摘要】:目的:观察侧脑室内注入外源性表皮生长因子(EGF)对内源性神经干细胞(NSCs)增殖、迁徙和分化、以及对神经结构和神经功能的影响,探讨其内在的可塑性机制。方法:采用肾血管性高血压大鼠复制一侧大脑中动脉皮层支闭塞(MCAO)模型。MCAO术后24小时,随机选取64只EGF组大鼠侧脑室注入10 μL/d(0.1μg/μL)EGF,连续2天;64只MCAO大鼠只注入不含EGF的等量稀释液,作为vehicle组。MCAO术后1、2、3和4周,行肢体运动神经功能评估后,各组分别随机选取16只大鼠,其中8只多聚甲醛心腔灌注处死、取脑连续冠状石蜡切片,HE染色计算脑梗死灶体积,免疫组化检测nestin、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和微管相关蛋白2(MAP2),部分切片行nestin和GFAP的双重免疫染色,及原位杂交检测nestin和神经粘蛋白(neurocan)的mRNA表达;另8只生理盐水心腔灌注,取脑组织匀浆,Western blotting定量检测脑梗死灶同侧和对侧nestin、生长相关蛋白43(GAP43)、突触囊泡蛋白(SYN)、GFAP、MAP2、神经细胞黏附分子(NCAM)、neurocan以及reelin。各检测指标均同时与16只sham组(假手术对照组)大鼠比较。结果:1.MCAO术后各周,大鼠瘫痪肢体运动功能呈现先快后慢的自然恢复:EGF促使大鼠神经功能在MCAO术后1周和2周改善较同期vehicle组更明显(P0.05)。2.MCAO术后各周,随时间延长大鼠脑梗死灶体积逐渐减少;EGF促使脑梗死灶体积在MCAO术后各周较同期vehicle组减少更明显(P0.05)。3.MCAO术后各周,与同期vehicle组相比,EGF促使梗死灶同侧SVZ内nestin和梗死灶周围GFAP染色更强(P0.05),而梗死灶周围MAP2染色无差异(P0.05),可见SVZ内nestin阳性NSCs显著增殖并沿胼胝体向同侧梗死灶、或向基底节下区迁徙,并分化表达GFAP,双重免疫染色显示梗死灶周围增厚的胶质屏障由nestin和GFAP均阳性的星形胶质细胞组成。4.MCAO术后各周,与同期vehicle组相比,Westernblotting显示EGF可促使梗死灶同侧脑nestin、SYN、GAP43、GFAP、NCAM、reelin和neurocan更早期和更高的表达,而降低MAP2表达(P0.05)。5.MCAO术后各周,与同期vehicle组相比,原位杂交显示EGF促使梗死灶同侧nestin和neurocan mRNA的更早期表达,大约在卒中2周后表达减弱。结论:1.EGF促使卒中后SVZ内NSCs增殖,向梗死灶迁徙,并主要促其分化为GFAP阳性星形胶质细胞,梗死灶周围增殖的星形胶质细胞可能部分来源于迁徙NSCs的分化。2.EGF加速卒中后瘫痪肢体的早期运动功能康复,而对卒中后瘫痪肢体的远期运动功能康复无影响;同时,EGF可能主要通过星形胶质细胞的增殖来加速梗死灶的结构修复。3.EGF可能通过促使卒中后nestin、SYN、GAP43、GFAP、NCAM、neurocan和reelin等神经可塑性物质的早期高峰表达而调节卒中后的早期神经可塑性。

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