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《2005'中国修复重建外科论坛论文汇编》2005年
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大鼠骨髓间充质干细胞分离、体外培养和向软骨细胞表型定向分化的实验研究

丁晓飞  赵劲民  陈维平  杨志  苏伟  
【摘要】:目的探讨分离骨髓间充质干细胞(MSCs)并诱导其向软骨细胞转化的体外培养方法,为软骨组织工程的种子细胞来源提供实验依据。方法抽取大鼠四肢骨髓,Percoll梯度分离液离心分离结合贴壁筛选法得到MSCs,在含15%FBS的低糖DMEM培养液中,置于37℃,5%CO2培养箱内培养10~14d。传代后以15%FBS的高糖DMEM培养液(含TGF-1 10ng/ml,地塞米松10~mol/L,VitC 50μg/m1)对其进行诱导培养。观测在体外培养条件下MSCs的形态、生长特点和诱导培养后软骨特异性基质的表达情况。结果①分离获取了较高纯度的MSCs,保持了细胞的活性;②MSCs原代培养呈均匀分布的集落样生长,呈长梭形;传代培养中形态特性无明显变化,细胞增殖周期缩短,细胞均质性明显提高;③诱导后的细胞由梭形向多角形转变,Ⅱ型胶原免疫组化阳性。结论①采用Percoll梯度分离液离心分离结合贴壁筛选法可获得较高纯度和活性的MSCs;②MSCs在体外培养条件下能大量增殖。通过离体培养,可使体内环境下低丰度的MSCs实现数量扩增;③MSCs在特定培养液的诱导下能向软骨细胞表型转化,并能分泌软骨特异性基质,可成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源。

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