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荧光定量测定人体组织p16 CpG岛甲基化标志物诊断分析法

周静  曹婕  刘宏伟  邓大君  
【摘要】:目的 p16(CDKN2A)甲基化是预测上皮异型增生恶性转化的潜在的分子标志物。荧光定量甲基化特异性PCR又称为MethyLight,是检测此种临床标志物最合适的方法,经典的研究用70bp的p16甲基化MethyLight测定方法操作特异性差的问题,在本研究中我们建立了一种新的MethyLight测定方法,并且对这两种方法进行了对比。方法常规使用的150bp p16甲基化特异性PCR(MSP)扩增片断位于该基因的反义链,我们根据150bp MSP扩增判断对应的正义链设计了一个完全互补的115bp的新MethyLight方法,并且利用已经发表的78例MSP-p16甲基化与口腔黏膜异型增生癌变存在显著相关的前瞻性队列研究样品,分别用经典的70bp-MethyLight和新的115bp-MethyLight法进行p16甲基化再分析。结果在MSP阳性的样品中70bp-MethyLight甲基化阳性率和含量高于MSP阴性样品(阳性率37/44比38/58,P=0.035;含量中位数0.78比0.02,P0.007)。用已发表的MSP结果作为金标准,70bp-MethyLight法的灵敏性、特异性、准确度分别是70.5%、84.5%、55%。在44例MSP阳性样品中有26例115bp-MethyLight阳性,58例MSP阴性样品中有2例115bp-MethyLight阳性(P=0.000)。115bp-Methylight法的灵敏性、特异性、准确度分别是59.1%、98.3%、57.4%。尤其重要的是在年逾60岁的随访患者中,115bp-Methylight测定p16甲基化者的口腔癌的发生率明星高于阴性者(6/8比6/22,P=0.034),而在用70bp-Methylight测定p16甲基化时观察不到此现象。结论 115bp-MethyLight是一种实用的、特异性强的p16甲基化的临床检测方法。

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