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《全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集》 2011年
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miR-203调控食管癌干细胞自我更新的研究

余茜颖  郭黎平  陆士新  
【摘要】:目的 miRNA-203是一个首先在皮肤细胞中鉴定出来的小分子,在食管上皮细胞中的也有表达,miRNA-203与干细胞自我更新能力密切相关。Bmi-1是维持干细胞自我更新能力的重要基因。目前尚未见miRNA有调控肿瘤干细胞自我更新的研究,研究miRNA-203对食管癌干细胞自我更新调控的关键基因是具有前沿性和创新性研究。材料和方法利用食管癌细胞系EC9706和KYSE150分离得到富集肿瘤干细胞的SP(side population)细胞,预测了miRNA-203下游与干细胞自我更新密切相关的靶基因,并进行验证。进一步阐释miR-203在肿瘤干细胞调控机制中的重要性。结果 miR-203在SP亚群的表达显著低于NSP细胞亚群,而干细胞自我更新相关基因Bmi-1表达与miR-203相反。预测发现Bmi-1是miR-203的下游的靶基因。慢病毒转染食管癌细胞系EC9706后得到了稳定高表达miR-203的细胞株Lenti-miR-203。与对照相比Bmi-1蛋白在Lenti-miR-203细胞株中表达明显下降;在EC9706中转染化学合成的miR-203后,也得到相似的结果;在双荧光素报告基因实验中,构建的Bmi-1的3'UTR荧光报告质粒转染至Lenti-miR-203细胞株中荧光活性显著下降,而构建的Bmi-1的3'UTR结合位点突变质粒转染后,荧光活性得到一定的恢复。验证Bmi-1确实是miR-203的一个靶基因。在肿瘤干细胞SP向NSP细胞分化的过程中,Bmi-1在蛋白水平随着分化程度的增高而表达量逐渐下降。与对照组相比,Lenti-miR-203细胞株体外成克隆能力显著下降,对化疗药物的敏感性增加,裸鼠体内的致瘤能力明显减弱。将miR-203高表达细胞株做SP流式检测,发现其SP细胞的比例明显下降。结论 miR-203及其靶基因Bmi-1在肿瘤干细胞调控中起到重要作用,miR-203可能通过Bmi-1来调控食管癌肿瘤干细胞的自我更新。

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