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《中国抗癌协会胆道肿瘤专业委员会成立大会暨第一届全国胆道肿瘤学术会议论文集》2009年
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Wnt通路相关因子在胆管癌细胞系中的表达及其siRNA干扰实验

张昆松  梁力建  殷晓煜  
【摘要】:目的以体外培养的胆管癌细胞系为基础,进一步验证Wnt经典通路在体外培养胆管癌细胞系中的表达,并利用siRNA技术探讨抑制Wnt经典通路特定靶点从而抑制Wnt通路活化的可能,为肝门部胆管癌的基因治疗提供更多的选择。方法按不同来源之体外培养胆管癌细胞系分组,利用RT-PCR技术、Western-Blot技术、免疫荧光染色技术分别从mRNA水平、蛋白水平检测Wnt经典通路相关因子及其靶基因的表达情况。利用RNAi干涉技术,将靶向Wnt2及β-catenin的siRNA投递入细胞系FRH0201,利用RT-PCR技术、Western-Blot技术、免疫荧光染色技术、流式细胞仪技术、MTT细胞增殖检测方法分别从mRNA水平、蛋白水半、细胞周期、凋亡、增殖水平检测siRNA转染前后Wnt经典通路相关因子及其靶基因的表达情况。结果Wnt经典通路在体外培养肝门部胆管癌细胞系FRH0201及肝内胆管癌细胞系HCCC9810、SSP-25、RBE中均有激活,但其核心因子Wnt2、Wnt3、TCF4、β-catenin及其靶基因c-myc、cyclin D1在4种细胞系中的表达存在差异,以FRH0201中表达为高。以lipofectamin2000为载体投递靶点分别为Wnt2和β-catenin的siRNA入FRH0201细胞系,投递效率超过50%,并明显敲低靶点基因表达,其mRNA水平沉默效率超过90%。转染该siRNA后可明显抑制Wnt经典通路的活性,并在转录水平下调c-myc的表达,促进肿瘤细胞的凋亡,抑制细胞的增殖。但对cyclin D1作用不明显。结论体外培养胆管癌细胞系内存在Wnt经典通路的激活。靶向Wnt2和β-catenin的siRNA技术可做为肝门部胆管癌基因治疗的可能选择。
【作者单位】:中山大学附属第一医院肝胆外科
【分类号】:R735.8

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