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《全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集》2007年
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EB病毒致瘤蛋白LHP1通过NF-κB和AP-1信号转导通路上调鼻咽癌细胞Ig kappa轻链的表达

刘海丹  郑慧  唐敏  胡多沙  黎明  曹亚  
【摘要】:目的:从信号转导角度探讨EB病毒编码的致瘤蛋白LMP1上调鼻咽癌细胞Ig kappa轻链表达的分子机制。方法:利用Dox剂量诱导LMP1表达的细胞系Tet-on-LMP1 HNE2、LMP1阴性的HNE2和LMP1阳性的HNE2-LMP1鼻咽癌细胞,分析经0,0.06,0.6,6.0 μg/ml Dox诱导LMP1表达后Ig kappa轻链恒定区mRNA及Ig kappa轻链蛋白的表达。利用特异的NF-κB小分子抑制剂Bay11-7082和IκBα显性负性突变体(DNMIκBα)下调NF-κB活性;利用特异的JNK抑制剂SP600125和c-Jun显性负性突变体(TAM67)下调AP-1活性;利用特异性靶向LMP1的脱氧核酶抑制LMP1的表达;通过荧光激活细胞分选技术(FACS)、Western Blotting、RT-PCR等方法检测Ig kappa轻链表达量变化。结果:随着Dox诱导剂量增加,Ig kappa轻链mRNA及蛋白呈剂量依赖性地增加,Ig kappa轻链特异性平均荧光强度(MFI)也呈剂量依赖性地增加。20μm Bay11-7082处理12h后,LMP1阴性HNE2鼻咽癌细胞中Ig kappa 特异性MFI为22.86,DMSO对照组为26.25,两者差异不显著(P>0.05);而LMP1阳性的 HNE2-LMP1鼻咽癌细胞中Ig kappa特异性MFI为17.34、稳定转染了DNMIκBα的HNE2-LMP1 细胞为16.66,均明显低于DMSO对照组60.82(P<0.05)。20μm SP600125处理12h后,HNE2 细胞中Ig kappa特异性MFI为23.47,DMSO对照组为26.25,两者差异不显著(P>0.05);而 HNE2-LMP1细胞中Ig kappa特异性MFI为23.91、稳定转染了TAM67的HNE2-LMP1细胞为 17.33,明显低于DMSO对照组60.82(P<0.05)。Western Blotting结果表明,小分子抑制剂 Bay11-7082、SP600125分别抑制IκBα、JNK磷酸化后,LMP1诱导的Ig kappa表达上调受到相应的抑制。稳定转染了DNMIκBα及TAM67的鼻咽癌细胞与HNE2-LMP1亲本细胞比较,Ig kappa蛋白表达明显下调。特异靶向LMP1的脱氧核酶DZ1抑制LMP1表达后Ig kappa表达相应降低。结论:EB病毒LMP1从mRNA及蛋白水平上调鼻咽癌细胞Ig kappa轻链表达。LMP1 激活的NF-κB和AP-1信号转导通路参与了LMP1对鼻咽癌细胞Ig kappa轻链的表达上调。

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