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《第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议教育集》2006年
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基于LCM技术的人子宫内膜癌相关基因的筛选、克隆与鉴定

刘文欣  
【摘要】:目的:排除混杂细胞的干扰,筛选、克隆与鉴定人子宫内膜癌发病特异相关的基因片段,探索子宫内膜癌发生的分子机制。方法:运用激光捕获显微切割技术(LCM)获取无间质混杂的人正常子宫内膜腺管上皮细胞与子宫内膜癌细胞,提取微量RNA并进行纯化及浓缩,采用荧光差异显示技术(FDD-PCR)筛选与子宫内膜癌发病特异相关的差异基因片段,克隆测序后反向Northern点杂交(使用扩增的RNA)验证差异片段的真假,对阳性片段利用Genebank进行BLAST比对分析。结果:共获得38条差异条带,3条在正常子宫内膜中高表达,35条在子宫内膜癌中高表达。对10条再回收差异条带进行克隆并测序,经反向Northern点杂交鉴定获得6条阳性差异基因片段。经BLASF比对分析发现:L1.1与细胞周期蛋白依赖性激酶7(CDK7)同源性为99%;L1.9与人类蛋白磷酸酶1调节抑制亚单位12A(PPP1R1A)同源性为99%;L1.21和L1.22与 E1A激活基因1的抑制子(CERG)同源性为100%;L1.25、L1.26与锌转运家族中的10号锌转运体(SLC39A10)同源性为 98%以上。结论:通过LCM技术与FDD-PCR技术的结合,获得了与子宫内膜癌发病特异相关的基因片段。首次从基因水平发现了CDK7、PPP1R12A、CREG、SLC39A10与子宫内膜癌发病的相关性,补充了对子宫内膜癌发病的分子机理的认识。其中CDK7、CREG、SLC39A10可以作为新的子宫内膜癌候选癌基因,PPP1R12A可以作为新的子宫内膜癌候选抑癌基因来进行进一步更深层次的研究。
【作者单位】:天津医科大学附属肿瘤医院盆腔科
【分类号】:R737.33

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